一种扩增甲型流感病毒全基因组试剂盒及制备方法和应用

摘要

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种扩增甲型流感病毒全基因组试剂盒及使用方法。本发明试剂盒包含反转录引物混合物、反转录缓冲液、反转录酶、PCR扩增缓冲液及DNA聚合酶。本发明根据甲型流感病毒设计一条反转录引物和一对通用型扩增引物，采用反转录、PCR扩增2个步骤完成。该试剂盒可对所有亚型的甲型流感病毒的8个基因节段同时进行扩增，具有较强的广谱性，可在6小时内完成反应，扩增产物可用于分子克隆、测序反应等，为甲型流感病毒全基因组的扩增提供了简单快速的手段。

主权项

一种扩增甲型流感病毒全基因组的试剂盒，其特征是由反转录引物混合物、反转录缓冲液、反转录酶、PCR扩增缓冲液及DNA聚合酶组成，其中反转录引物混合物含有反转录引物和三磷酸脱氧核糖核苷酸混合物dNTPs，反转录缓冲液包含反转录酶缓冲液、RNA酶抑制剂；反转录酶为AMV反转录酶；PCR扩增缓冲液含有PCR扩增引物混合物及DNA聚合酶反应缓冲液；DNA聚合酶为具有3′→5′Exonuclease活性或Proof reading活性的耐热性DNA聚合酶；反转录引物为针对所有亚型流感病毒8个节段的特异引物,序列为5’‑AGCRAAAGCAGG‑3’，R代表A或G碱基；PCR扩增引物为针对所有亚型流感病毒8个节段的特异引物，序列为：1：5’‑CTGTACGGTATGTGCGAAACAGCRAAAGCAGG‑3’2：5’‑TCGTAAGGCTATCAGTCAGGAGTAGAAACAAGG‑3’其中下划线部分为固定序列，在其5’端进行的任何修饰或变异体或加接头序列均为本发明保护范围。