| 主权项 |
1.一种检测生物学样品中人细小病毒B19感染的方法，其特征在于，该方法包括：(a)分离怀疑含有人细小病毒B19 DNA的生物学样品中的核酸，其中，所述核酸含有RNA靶序列；(b)使分离得到的细小病毒B19核酸与第一寡核苷酸反应，该第一寡核苷酸含有第一引物，该第一引物含有与所述RNA靶序列的3′末端部分充分互补而能与其复合的复合序列，其中，所述第一引物还含有DNA依赖性RNA聚合酶5′的启动子，该启动子操作性连接于所述复合序列，所述反应在能形成寡核苷酸/靶序列复合物和启动DNA合成的条件下进行；(c)以所述RNA靶序列为模板，在延伸反应中使所述第一引物延伸，产生与所述RNA靶序列互补的第一DNA引物延伸产物；(d)用能选择性降解所述RNA靶序列的酶将所述第一DNA引物延伸产物从所述RNA靶序列中分离；(e)在形成寡核苷酸/靶序列复合物和启动DNA合成的条件下，用第二寡核苷酸处理所述DNA引物延伸产物，所述第二寡核苷酸含有第二引物，该第二引物含有与所述DNA引物延伸产物的3′末端部分充分互补而能与其复合的复合序列；(f)在DNA延伸反应中延伸所述第二引物的3′末端，产生第二DNA引物延伸产物，从而产生DNA依赖性RNA聚合酶的模板；(g)利用所述模板和能识别所述启动子序列的DNA依赖性RNA聚合酶产生所述靶序列的多个RNA拷贝；和(h)使用步骤(g)的RNA拷贝，自身催化性地重复步骤(b)到步骤(g)，以扩增所述靶序列。 |
