益生菌中黑芥子酶活性检测方法

摘要

本发明公开了一种益生菌中黑芥子酶活性检测方法。针对黑芥子酶可能是诱导酶的情况，使用黑芥子酶的反应底物黑芥子硫苷酸钾对菌体进行诱导，然后再测定黑芥子酶的活力。首先使用黑芥子硫苷酸钾代替葡萄糖进行初筛，初步判断菌株有无分解黑芥子硫苷酸钾的能力。再使用黑芥子硫苷酸钾诱导菌体产生黑芥子酶，使菌体产生黑芥子酶的代谢通路激活，然后将完整菌体加入到一定浓度黑芥子硫苷酸钾溶液中进行代谢，一定时间后离心去除菌体，测定上清液在340nm处的吸光度值，发现此时的吸光度值与不加入菌体的相同浓度的黑芥子硫苷酸钾溶液的吸光度值相比变化显著。因此，诱导菌体法测定益生菌中黑芥子酶活性的方法可行。该方法操作简单，检测周期短。

主权项

一种益生菌中黑芥子酶活性检测方法，其特征在于所述方法步骤如下：一、将待测益生菌于无菌条件下以2%接种量接种于改良MRS液体培养基中，于37℃恒温培养24h，如此反复活化2‑3次，使菌株恢复活力，所述益生菌为杆菌类益生菌，改良MRS液体培养基的配制方法如下：蛋白胨10g、牛肉浸取物 10g、酵母提取物 5.0g、乙酸钠5.0g、柠檬酸钠2.0g、磷酸氢二钾 2.0g、七水硫酸镁 0.2g、七水硫酸锰 0.05g，溶于水，然后加1ml 吐温 80，用水调至1000ml；二、初筛：用含黑芥子硫苷酸钾浓度为5mmol/L的改良MRS培养液5mL培养待筛菌株，培养时间48h，培养温度30℃，观察菌株生长情况，能够正常生长的菌株用于下一步实验；三、复筛：配制葡萄糖和黑芥子硫苷酸钾浓度均为10mmol/L的改良MRS培养液；将待筛选菌株按常规接种量接种到该改良MRS培养液30℃过夜培养12‑18h，然后离心取菌体，加入10mLMES缓冲液冲洗菌体，再次离心后将菌体重悬于3mLMES缓冲液中，将菌悬液与10mmol/L黑芥子硫苷酸钾的MES缓冲液按照1‑1.5:1的体积比混合，在30℃培养24‑48h，最后离心取上清液在340nm处测定吸光度，与不加入菌体的10mmol/L黑芥子硫苷酸钾的MES缓冲液的吸光度值相比，筛选出吸光度值差异在0.2以上的菌株。