一种诱发水稻抗氯磺隆体细胞突变体的方法

摘要

本发明公开了一种诱发水稻抗除草剂体细胞突变体的方法。它由诱导培养、继代培养、筛选培养、分化培养、再分化培养组成。操作者先将健康成熟种子去壳，再在无菌条件下，将成熟胚置于乙醇中浸泡，用氯化汞溶液浸泡，用无菌水冲洗，将已消毒的成熟胚接种在诱导培养基上加入5－溴尿嘧啶诱变剂黑暗培养；诱导培养的愈伤组织转入继代培养基上黑暗培养；愈伤组织再转入筛选培养基上加入氯磺隆黑暗培养；筛选培养后，将已成活的愈伤组织转入分化培养基上光照培养，再将已分化的愈伤绿块转入再分化培养基上并加入氯磺隆除草剂，在光照下筛选培养。本发明操作简便，效果好，适应性广，培育一个抗除草剂新品种比常规育种方法提前3－4年完成。

主权项

1、一种诱发水稻抗氯磺隆体细胞突变体的方法，它包括下列步骤：A、配制培养基，诱导培养基：基本培养基中加入2mg/L二氯苯氧乙酸和20-30mg/L5-溴尿嘧啶；继代培养基：培养基中加入2mg/L2，4-D和0.2mg/L6-苄基氨基嘌呤；筛选培养基：培养基中加入2mg/L2，4-D和0.2mg/L6-BA及25-50mg/L氯磺隆；分化培养基：培养基中加入2mg/6-BA和0.5mg/L萘乙酸；再分化培养基：培养基中加入2mg/L6-BA和0.5mg/LNAA及50-60mg/L氯磺隆；B、培养时间：诱导、继代、筛选培养，将已消毒的成熟胚材料接于诱导培养基上，置于黑暗条件下进行诱导愈伤组织培养，并加入5-溴尿嘧啶诱变剂培养18-20天；继代培养：将诱导培养基上的愈伤组织转入继代培养基上培养18-20天，扩大愈伤组织抗氯磺隆细胞群体；筛选培养：将继代培养获得的愈伤组织切割成直径为1.5-2.0毫米，转入筛选培养基上培养18-20天；C、分化、再分化培养时间：在光照条件下愈伤组织进行再分化绿苗培养，12-14小时的光周期，分化培养，将筛选培养基上已成活的愈伤组织转入分化培养基上培养15-16天分化绿块；15-16天后进入再分化培养，将已分化的愈伤绿块转入再分化培养基上培养15-16天，筛选抗氯磺隆除草剂再生植株苗；D、诱导、继代、筛选、分化培养温度控制在26-27℃。