利用细胞行为调控获取纤维堆囊菌液体发酵菌株的方法

摘要

本发明公开了一种利用细胞行为调控技术获取纤维堆囊菌液体发酵优良菌株的方法，主要是采取细胞行为调控的方法，减少和去除纤维堆囊菌菌株胞外多糖的分泌，去除菌体生长的社会性细胞行为特征，并且实现纤维堆囊菌的液体分散生长。改造和筛选获得的纤维堆囊菌液体发酵菌株具有代时短，生长迅速，液体分散生长，细胞密度高等优点。本发明的工艺方法能够大大降低利用纤维堆囊菌工业化发酵制备各种发酵产物的成本，提高了效率，具有很好的经济效益。

主权项

1.一种利用细胞行为调控技术获取纤维堆囊菌液体发酵优良菌株的方法，包括：(1)纤维堆囊菌菌株胞外多糖分泌的减少或去除，(2)纤维堆囊菌社会性细胞行为特征的去除，(3)纤维堆囊菌液体分散生长的实现，(4)生长迅速、代时减少的纤维堆囊菌液体发酵优良菌株的获得；其特征是：步骤(1)所述的纤维堆囊菌菌株胞外多糖分泌的减少或去除是指：进行纤维堆囊菌菌株连续液体传代培养时，在MML液体培养基中添加非离子型表面活性剂，浓度从0.05％依次递增到0.5％，每级梯度增加0.15％，在一个浓度条件下进行两次或两次以上的传代培养，逐级进行，最终实现纤维堆囊菌菌体液体培养时胞外粘液类物质的减少或去除；步骤(2)所述的纤维堆囊菌社会性细胞行为特征的去除是指：将获得的胞外多糖产生能力显著降低的菌株接种于10-20ml液体CDM培养基中，30℃，120转/分摇床培养至稳定期前期，然后加入100-200ml新鲜CDM培养基稀释菌体，取出10-20ml混合液继续30℃，120转/分摇床培养，每两天进行一次同样的稀释和再培养，重复50-100次，即获得社会性细胞行为特征去除的纤维堆囊菌；步骤(3)所述的纤维堆囊菌液体分散生长的实现足指：将获得的社会性细胞行为特征去除的菌体转入MML液体培养基摇瓶中，30℃，200rpm摇床培养至指数期，倒弃2/3～9/10的培养液，并用残留的液体冲刷菌体球，合并于灭菌的含玻璃珠及搅拌子的三角瓶内，置磁力搅拌器上打匀菌体，以1∶10的体积比例接种于新鲜的MML液体培养基中，30℃，200rpm摇床培养至指数期；重复这一过程，直至纤维堆囊菌菌株实现液体分散生长；步骤(4)所述的生长迅速、代时减少的纤维堆囊菌液体发酵优良菌株的获得是指：通过步骤(1)至(3)的操作，获得无社会性细胞行为特征并且在液体中分散生长的纤维堆囊菌菌株，然后进行发酵条件优化，寻找此类菌株的适合培养条件，筛得优化的液体培养基，进而获得生长迅速、代时减少的纤维堆囊菌菌株，即为液体发酵的优良菌株。