一种波叶红果树组织培养快繁方法

摘要

本发明公开了一种波叶红果树组织培养快繁方法，涉及波叶红果树（Stranvaesia davidiana var.undulata）通过植物组织培养技术短时间内获得大量优质波叶红果树种苗的育种方法。本发明以波叶红果树叶片为外植体，经过愈伤组织诱导、增殖、分化、炼苗移栽等过程建立了波叶红果树组织培养的技术体系，达到提高波叶红果树的增殖系数，为今后开发利用波叶红果树奠定基础，为实现大规模生产提供技术支持。

主权项

一种波叶红果树组织培养快繁方法，其特征在于包括以下步骤： （1）外植体消毒：选取健康波叶红果树植株的叶片，先用洗洁精水溶液漂洗1～5min，再于自来水冲洗5～10min，擦干表面水分后在超净工作台中以70%～80%乙醇浸泡5～10s，0.1%升汞溶液消毒1～10min，再用无菌水清洗3～5次后无菌滤纸擦干后备用；（2）愈伤组织诱导：将步骤（1）处理后的叶片切成0.5cm×0.5cm的小块接种到诱导培养基上进行愈伤组织诱导，接种后置于每天光照12～15小时，光照强度为1000～1500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成愈伤组织，接种25天后观察愈伤组织诱导情况并统计愈伤组织诱导率；（3）增殖培养：将步骤（2）形成的愈伤组织转接于增殖培养基中进行继代培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养，20～25天转接一次；（4）分化培养：将步骤（1）或（2）形成的愈伤组织转接于分化培养基中进行不定芽诱导培养，接种后先在25～28℃条件下全暗培养3～7天，然后置于每天光照10～12小时，光照强度为2000～2500lx，培养温度为25～28℃的条件下培养直至形成不定芽和不定根；（5）炼苗移栽：待幼苗长至健壮后置于自然光照下炼苗5～7天后，洗净根部培养基，移栽到由营养土：沙土＝3:1混合成的基质，置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽大田；步骤（2）所述的诱导培养基为：MS+0.5～2mg/L TDZ+1～3mg/L2,4‑D +0.01～1mg/LLa(NO₃)₂+2.0%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8；步骤（3）所述的增殖培养基为：MS+0.1～1mg/LKT+0.1～1mg/L2,4‑D +2.0%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8；步骤（4）所述的分化培养基为：MS+1～5mg/L6‑BA+0.5～2mg/L2,4‑D +0.1～1mg/L NAA+2.0%～3.5%蔗糖+0.35%～0.5%琼脂+0.05%～0.1%活性炭，pH值为5.4～5.8。