一种悬浮培养细胞生产霍山石斛多糖的方法

摘要

本发明公开一种悬浮培养细胞生产霍山石斛多糖的方法，是一种利用细胞培养反应器悬浮培养霍山石斛细胞来生产霍山石斛多糖的方法。包括以下步骤：(1)单细胞制备,(2)单细胞系培养,(3)细胞群放大培养，(4)提取霍山石斛多糖：当细胞密度达到60000‑80000个/ml收集霍山石斛细胞，提取霍山石斛多糖。本发明能够大幅度缩短细胞培养周期，提高霍山石斛多糖产品收率，且工艺简单、稳定，适合工业化生产。

主权项

一种悬浮培养细胞生产霍山石斛多糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)单细胞制备：取霍山石斛蒴果消毒后用固体培养基进行无菌播种，待萌发成原球茎后取出，采用酶解法分离制备单细胞，并离心过滤除杂，收集单细胞；(2)单细胞系培养：将收集到的单细胞接种到第一MS液体培养基中培养；(3)细胞群放大培养：将培养好的单细胞系接种于第二MS液体培养基中培养；所述第二MS液体培养基中的磷元素含量为MS液体培养基的2‑3倍，所述第二MS液体培养基中还添加有1‑2mg/L的锗元素、0.02‑0.1mg/L硒元素和0.1‑0.2g/L的酸水解酪蛋白，pH值为5.8±0.4；(4)提取霍山石斛多糖：当细胞密度达到60000‑80000个/ml，采用离心收集霍山石斛细胞；再提取霍山石斛多糖。