一种A型产气荚膜梭菌毒素抗体的间接ELISA检测方法

摘要

本发明涉及动物细菌学领域，提供了A型产气荚膜梭菌毒素抗体的间接ELISA检测方法，该方法以制备的A型产气荚膜梭菌外毒素为抗原，一是用来免疫家兔制备高免血清，二是浓缩、纯化后作为间接ELISA的包被抗原；检测方法包括以下步骤：(1)包被(2)封闭(3)加待检样品(4)加入二抗(5)显色(6)终止(7)结果判定。此方法具有特异性高、灵敏度强、可重复性好、成本低等优点，另外此方法可以大批量检测样品，为该病的检测和研究提供了有效，简便的血清学诊断方法。

主权项

一种A型产气荚膜梭菌毒素抗体的间接ELISA检测方法，其特征在于：含有步骤如下：(1)A型产气荚膜梭菌抗原的制备:A型产气荚膜梭菌菌种接种于血平板培养基上进行复苏，37℃厌氧培养36h，选取单个的菌落接种液体硫乙醇培养基增菌12小时，然后将增菌液按体积百分比5％接种于改良的Gordon汤中，45℃培养5h产毒，将培养物离心后用0.22um蔡氏滤器过滤除菌，得到除菌后的A型产气荚膜梭菌外毒素；(2)兔抗A型产气荚膜梭菌外毒素高免血清的制备选取1.0‑1.5Kg健康未接种过疫苗的家兔3只，将灭活的上述A型产气荚膜梭菌外毒素和弗氏完全佐剂按照体积1:1混合乳化，背部皮肤多点注射；首免7天和15天后，将灭活的上述A型产气荚膜梭菌外毒素和弗氏完全佐剂按照体积1:1混合乳化，对家兔进行二免和三免；三免后10天扑杀家兔，无菌采血，自然凝固，离心取上清，所得高免血清作为间接ELISA阳性对照血清。