蛋白检测方法及蛋白检测试剂盒

摘要

本发明涉及新的蛋白检测方法、以及相应的蛋白检测试剂盒。具体而言，本发明涉及改良的双缩脲比色法，通过采用直链烷基硫酸钠和氢氧化钠的水溶液作为试剂A，并采用硫酸铜或水合硫酸铜、酒石酸钠和氢氧化钠的水溶液作为试剂B，从而能够适用于对含有溶解性差的蛋白的样品中的蛋白含量进行快速、准确的测定。同时，本发明所述的蛋白检测试剂盒具有配制简单、成本低廉和保质期长等优点。

主权项

一种蛋白检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)制备试剂A和试剂B：使直链烷基硫酸钠和氢氧化钠溶于水中至摩尔浓度分别为45‑100mM和150‑300mM，得到所述试剂A；将硫酸铜或水合硫酸铜、酒石酸钠和氢氧化钠依次溶于水中至摩尔浓度分别为5‑10mM、15‑30mM和150‑750mM，得到所述试剂B；(2)制备样品：使用不含蛋白的水或者缓冲液作为空白样品；将牛血清白蛋白溶于水或缓冲液中，并对所述蛋白的浓度进行调整，从而得到蛋白浓度处于0.2mg/mL‑30mg/mL范围内的一系列溶液，作为标准蛋白样品；将含蛋白的待测原料分散于或溶于水或缓冲液中，并通过任选的稀释处理制成待测样品；(3)将所述步骤(1)中制备的试剂A分别与所述步骤(2)中制备的空白样品、标准蛋白样品、待测样品等体积混合，得到相应的试剂A混合物，其中，所述待测样品的试剂A混合物中的蛋白含量符合线性范围的要求，将各试剂A混合物在温度为90‑100℃的水浴中加热后，取出冷却至室温；(4)将所述步骤(3)中得到的各试剂A混合物分别与所述步骤(1)中制备的试剂B混合，得到相应的试剂B混合物，并将各试剂B混合物在温度为50‑70℃的水浴中加热后，取出冷却至室温；(5)对所述步骤(4)中冷却后的各试剂B混合物进行过滤，以所述步骤(4)中冷却后的空白样品的试剂B混合物作为参比，使用分光光度计在540nm下测定所述步骤(4)中冷却后的标准蛋白样品的试剂B混合物和待测样品的试剂B混合物的吸光度；(6)根据所述步骤(3)中的标准蛋白样品的蛋白含量，采用如下的方程式(i)，通过线性拟合得出蛋白含量与吸光度之间的关系，并通过如下的方程式(ii)计算得出所述步骤(2)中所述的待测样品中的蛋白含量：(i)标准蛋白样品中的蛋白含量＝K×吸光度+C；(ii)待测样品中的蛋白含量＝(K×吸光度+C)×2×D，其中，K、C为拟合常数，D＝所述步骤(2)中制备待测样品时的稀释倍数。