发明名称 |
一种基于同尾酶构建的RNAi载体及其应用 |
摘要 |
本发明公开了一种基于同尾酶构建的RNAi载体,其特征在于所述载体构建方法为:将靶向基因的目的片段导入过渡载体,构建获得可以产生发夹结构RNA的RNAi载体;本发明方法利用同尾酶的特性,只需要通过一次PCR扩增获得一段DNA片段,对该片段酶切一次,可以简化构建流程,提高构建效率。同时,该方法构建的RNAi载体中形成发夹结构(目的片段‑内含子‑反向重复目的片段)的部分只需要两个同尾酶酶切位点,这样可以预留出更多的单克隆位点,提高载体构建的灵活性。利用本方法构建的RNAi载体可被广泛用于多个物种基因的功能研究、遗传改造以及分子育种等,在基础研究和农业生产上都具有十分重要的价值。 |
申请公布号 |
CN106086063A |
申请公布日期 |
2016.11.09 |
申请号 |
CN201610409729.3 |
申请日期 |
2016.06.12 |
申请人 |
浙江大学 |
发明人 |
张先文;王东芳;沈志成 |
分类号 |
C12N15/82(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;A01H5/00(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/82(2006.01)I |
代理机构 |
杭州天正专利事务所有限公司 33201 |
代理人 |
黄美娟;李世玉 |
主权项 |
一种基于同尾酶构建的RNAi载体,其特征在于所述载体构建方法为:将靶向基因的目的片段导入过渡载体,构建获得可以产生发夹结构RNA的RNAi载体;所述过渡载体中预置一个内含子和一个终止子,内含子的5’端依次设置同尾酶酶切位点A1、B1,3’端依次设置同尾酶酶切位点B2、A2,其中A1、A2为一组同尾酶酶切位点,B1、B2为另一组同尾酶酶切位点;所述目的片段的5’端和3’端分别设置A1、B1或者A2、B2酶切位点;通过两次酶切、连接和转化反应,把目的片段分别连入内含子的5’端和3’端,形成“目的片段‑内含子‑反向重复目的片段‑终止子”结构的DNA片段,再通过一次酶切、连接和转化反应把上述DNA片段连入预置有启动子的终载体中,或者DNA片段跟设计的启动子通过三段连接连入终载体,获得RNAi载体。 |
地址 |
310012 浙江省杭州市西湖区余杭塘路866号 |