重组米曲霉单宁酶及其表达和纯化方法

摘要

本发明涉及一种重组米曲霉单宁酶的表达以及纯化方法。本发明通过PCR方法将编码米曲霉单宁酶成熟蛋白的核苷酸序列用从米曲霉基因中扩增出来，克隆到甲醇酵母表达载体pPIC9K，构建表达载体pPIC9K－TAN，采用电击法转化毕赤酵母KM71获得重组菌株，并用高密度发酵的方法进行重组单宁酶的诱导表达。表达产物分布于发酵上清液中，表达量达200mg/L。本发明建立了重组米曲霉单宁酶的纯化方法，采用DEAE阴离子交换柱层析一步纯化。本发明还包括构建了重组单宁酶在毕赤酵母中的组成型表达载体pGAPZαA－TAN和pGAPZαA－ETAN，并通过转化毕赤酵母菌株KM71H获得了具有单宁酶活性的工程菌株，能够以分泌形式表达重组单宁酶。本发明的重组米曲霉单宁酶具有生物活性。

主权项

1.一种重组表达的米曲霉单宁酶，其氨基酸序列如序列表序列<400>2所示。