用于细胞三维培养的光响应智能凝胶微球的制备方法

摘要

本发明涉及用于细胞三维培养的光响应智能凝胶微球的制备方法，其特征在于步骤如下：(1)取聚(甲基乙烯基醚-马来酸酐)和β-环糊精，溶于溶剂N,N-二甲基甲酰胺中，在氮气保护下，加热反应，去除溶剂；将聚乙二醇20000和的琼脂糖的混合物水溶液，加入上述反应物中，震荡至溶解，制备得到水相溶液，备用；将水相溶液逐滴滴入到油相二甲基硅油中，加热搅拌反应，静置，弃去上清液，清洗沉积在容器底部的微球，真空干燥，得到凝胶微球；将凝胶微球放入Azo-RGD的甲醇水溶液，室温震荡24小时，用去离子水反复漂洗，N₂干燥，得到的微球能模拟细胞在体内的生长环境，实现细胞在微球上吸附、分离可控。

主权项

一种用于细胞三维培养的光响应智能凝胶微球的制备方法，其特征在于包括以下步骤：步骤(1)、水相溶液的制备：取聚(甲基乙烯基醚‑马来酸酐)和β‑环糊精，溶于溶剂N,N‑二甲基甲酰胺中，在氮气保护下，于60‑100℃下加热反应8‑10小时，旋转蒸发，除去N,N‑二甲基甲酰胺；将聚乙二醇20000和琼脂糖的混合物水溶液，加入上述反应物中，震荡至溶解，得到水相溶液，备用，聚乙二醇20000的浓度为0.0667‑0.2000g/mL，琼脂糖的浓度为0.0031‑0.0102g/mL，制备得到水相溶液的浓度为0.1591‑0.3450g/mL；步骤(2)、微球的形成：将步骤(1)得到的水相溶液逐滴滴入到油相二甲基硅油中，加热搅拌反应12h～72h，静置，弃去上清液，微球沉积在容器的底部，清洗微球表面的油相，真空干燥，得到凝胶微球；步骤(3)、改性4‑氨基偶氮苯与精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸的聚合物与凝胶微球的组装：将改性4‑氨基偶氮苯与精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸的聚合物溶于甲醇中，再将得到的甲醇溶液滴入去离子水中，形成混合溶液，溶液浓度为1mg/mL，将凝胶微球放入混合溶液中，室温震荡24小时，用去离子水反复漂洗，用氮气干燥微球；步骤(4)、细胞的吸附与分离：常温下，将细胞与微球一起培养，改性4‑氨基偶氮苯与精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸的聚合物进入聚(甲基乙烯基醚‑马来酸酐)‑环糊精中的疏水内腔，形成主客体包络物，将细胞吸附在微球上；在365nm紫外光照射下，改性4‑氨基偶氮苯与精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸的聚合物由反式转为顺式，从β‑环糊精内腔脱落，细胞从微球分离，实现凝胶微球与改性4‑氨基偶氮苯与精氨酸‑甘氨酸‑天冬氨酸的聚合物的组装与分离的光可控。