抗呼吸道合胞病毒F蛋白和G蛋白的免疫球蛋白制备方法

摘要

本发明公开了一种抗呼吸道合胞病毒F蛋白、G蛋白的免疫球蛋白的制备方法，首先从呼吸道合胞病毒提取F蛋白、G蛋白作为抗原，其次经组织培养制备的病毒抗原，以不连续梯度密度离心纯化抗原，然后用所制备的纯化抗原，建立筛选高效价抗呼吸道合胞病毒F蛋白、G蛋白的免疫球蛋白的方法，及体外中和病毒试验等。最后用低温乙醇方法或离子交换层析法方法或亲和层析法在具有高效价抗呼吸道合胞病毒F蛋白、G蛋白的免疫球蛋白血源中提取免疫球蛋白。

主权项

1.抗呼吸道合胞病毒F蛋白、G蛋白的免疫球蛋白制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)制备含有呼吸道合胞病毒F蛋白、G蛋白的抗原将呼吸道合胞病毒接种于已成长单层的Hep-2细胞或hela细胞或人胚肾细胞或KB细胞或人胚肺二倍体细胞或Vero细胞，在培养箱中培养，每天观察细胞病变情况，当致细胞病变(CPE)出现+++(即细胞病变约占整个单层细胞75％)，收集细胞及上清，病毒灭活，在-70℃反复冻融，再经超声打碎、冰冻保存；2)纯化病毒抗原用氯化铯或蔗糖或多聚蔗糖作为介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，通过重力或离心力场的作用使病毒碎片分层、分离，或层析吸附柱方法纯化病毒抗原；将超声打碎的呼吸道合胞病毒培养液高速离心20分钟，弃去沉渣留上清，装入以5％、15％、30％、45％、60％的蔗糖制备的不连续梯度密度离心管，超速离心2小时，根据病毒的分子量确定该病毒所在离心管位置，吸出冰冻保存；3)建立筛选高效价呼吸道合胞病毒F蛋白、G蛋白的免疫球蛋白方法用从呼吸道合胞病毒中提取的含有F蛋白和G蛋白的病毒碎片混合成10μg/ml～20μg/ml包被酶板，利用结合在固相载体表面的抗原仍保持其免疫学活性，在测定时，血浆或血清中RSV的F蛋白、G蛋白抗体与固相载体表面的F蛋白、G蛋白起反应，再用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开，再加入酶标记的抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例，加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析，由于酶的催化效率很高，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到很高的敏感度；4)用上述方法筛选的原料用硫酸铵沉淀法或聚乙二醇沉淀法或低温乙醇方法或/和离子交换层析法方法或/和亲和层析法提取高效价抗呼吸道合胞病毒F蛋白、G蛋白的免疫球蛋白；5)提纯后的抗呼吸道合胞病毒免疫球蛋白经60±1℃，10小时灭活病毒和/或在pH值4.1±0.3，在24±1℃条件下放置21天和/或纳米膜过滤和/或溶剂/表面活性剂(S/D)法和/或干热法(80℃，72小时)去除、灭活病毒，再经除菌过滤，分装成或冻干成抗呼吸道合胞病毒F蛋白、G蛋白的免疫球蛋白。