一种高效获得多年生黑麦草转基因植株的农杆菌介导转化体系及其应用

摘要

本发明一种高效获得多年生黑麦草转基因植株的农杆菌介导转化体系及其应用，包括以下步骤：通过高频再生体系获得胚性愈伤受体材料；供体菌株的培养；抑菌素浓度的确定；农杆菌转化条件的优化；转化愈伤的筛选培养和植株再生和抗性植株的分子检测。通过优化农杆菌转化时所涉及到的各项影响条件，包括菌液浓度、侵染时间、侵染条件、共培养时间、抑菌素的添加浓度等，提供了一种适用于多年生黑麦草的农杆菌介导转化体系。克服了现有农杆菌介导技术难以应用于禾本科植物遗传转化的缺陷，建立起了以胚性愈伤为受体材料的高效多年生黑麦草农杆菌介导转化体系。

主权项

1一种高效获得多年生黑麦草转基因植株的农杆菌介导转化体系的方法，该方法包括以下步骤：(1)培养供体菌株，以胚性愈伤组织为侵染的受体材料；(2)农杆菌介导法转化条件的优化，优化后用于侵染的农杆菌菌液浓度为OD600值0.1左右，侵染过程中采用抽真空方式，侵染时间为10min，侵染后将愈伤置于底层铺有若干灭菌滤纸的培养皿中，上层再覆盖小块滤纸，并用镊子轻施压力，使愈伤组织上多余的菌液能够被充分吸干；(3)转化愈伤的筛选培养和植株再生，筛选培养时抑菌素浓度为300mg/L，再生培养时为250mg/L；(4)抗性植株的分子检测。