一种扩增微粒体环氧化物水解酶基因的方法

摘要

本发明涉及一种扩增微粒体环氧化物水解酶基因的方法，属于分子生物学和临床医学领域。本发明选择在GenBank上发表的mEPH酶外显子3、4的编码基因，利用DNAman生物学软件进行同源性分析，根据保守序列设计了一对简并引物。本发明以COPD吸烟患者和健康吸烟者的mEPH酶基因组DNA作为模板，利用简并引物扩增得到蛋白酶编码基因的保守序列。本发明扩增得到的mEPH酶蛋白酶基因多态性与COPD的易感性有关，且携带mEPH慢/很慢活性基因型的个体更易感COPD。由于mEPH酶是参与COPD发病机制中的重要抗氧化酶，因此本发明得到的基因可指导易感COPD人群避免从事一些接触煤灰、粉尘等的工作，从而减少COPD的发病率，提高COPD的防治水平。本发明的方法具有快捷、简便、经济、结果更准确等优点。

主权项

1、一种扩增微粒体环氧化物水解酶基因的方法，包括基因组DNA的提取、用引物进行PCR扩增、扩增片段测序及测序结果分析步骤，其特征在于本方法中所用引物由下列方法设计得到：(1)选择在GenBank上发表的索引号为U06657、U06658的mEPH酶外显子3、4的编码基因；(2)利用DNAman生物学软件进行同源性分析，根据保守序列设计出简并引物：mEPH exon3：上游引物：5’-GAA ACT GCC TTG CCA CTC-3’ 下游引物：5’-CCT GCC TAG CTC TAA AGA TG-3’；mEPH exon4：上游引物：5’-ACA TCC ACT TCA TCC ACG T-3’ 下游引物：5’-ATG CCT CTG AGA AGC CAT-3’；扩增片段为：mEPH exon3：上游引物：(62bp...79bp)；下游引物：(556bp...575bp)；mEPH exon4：上游引物：(49bp...512bp)；下游引物：(685bp...702bp)。