一种富集4000人类致病靶基因的方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种富集4000人类致病靶基因的方法及试剂盒，包括以下步骤：DNA打碎得到DNA片段，末端修复，加A，加接头，进行Pre‑Capture LM‑PCR；将4000人类致病靶基因的Pre‑capture LM‑PCR产物混合得到混合文库样本，使用4000人类致病靶基因特异性探针文库与混合文库样本杂交，磁珠捕获DNA并洗脱；进行Post‑capture LM‑PCR。所述试剂盒包含DNA末端修复试剂、加A试剂、加接头试剂、LM‑PCR试剂和捕获试剂。本发明选择4000个人类致病基因作为的靶点并组合在一起，通过生物素探针捕获技术一次性富集这些个基因序列，并行高通量测序，可同时检查基因的多种变异类型，检测敏感度高，可使4000致病基因成为临床上的主要诊断检测手段，有利于降低成本，减少漏诊，提高检测阳性率，利于其临床推广。

主权项

一种富集4000人类致病靶基因的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、提取总DNA并将其打碎，得到DNA片段；S2、对DNA片段进行末端修复，得到平末端DNA片段；S3、在平末端DNA片段3’端加A，得到加A的DNA片段；S4、在加A的DNA片段的3’端加接头，得到加接头的DNA片段；S5、对加接头的DNA片段进行Pre‑Capture LM‑PCR；S6、将4000人类致病靶基因的Pre‑capture LM‑PCR产物混合得到混合文库样本，使用4000人类致病靶基因特异性探针文库与混合文库样本杂交，磁珠捕获DNA并洗脱；S7、磁珠捕获的DNA样本进行Post‑capture LM‑PCR。