一种低聚木糖各组分的分离纯化方法

摘要

本发明公开了一种利用活性炭对低聚木糖各单一组分分离纯化的方法，其步骤为吸附、解析、冲洗、纯化、浓缩、冷冻、冻干。因各种糖分子的聚合度不同，活性炭对其的吸附能力不同，解析后在流动相中的分布不同，分子量较小的木二糖先被解析下来，然后以木三糖至木七糖的顺序各木糖逐渐被解析下来，因而能使各种单体得到分离。本发明制备方法以价廉易得的活性炭为吸附介质，操作简单易掌握，所得到的低聚木糖单一组分的纯度≥98％。

主权项

1、一种低聚木糖各组分的分离纯化方法，步骤如下：(1)煮炭：取活性炭，缓缓倒入烧杯中，加纯水至淹没活性炭，用电炉加热至沸腾，恒沸30分钟，期间不停搅拌，排出活性炭空隙中的空气；(2)装炭：蒸煮完毕后将上述冷却后的活性炭与水的混合液缓缓倒入层析柱内，柱体下部要打开阀门将多余水流出，但要保持柱液面高于活性炭炭面，期间用软木塞或者胶体塞不停敲打柱体，使活性炭沉降均匀和密实，然后在活性炭表面盖一层普通滤纸；(3)洗炭：打开蠕动泵用纯水冲洗活性炭，调节柱流速为0.8-3mm/min，冲洗24-48小时；(4)进样：取活性炭质量1/25的低聚木糖溶于纯净水中，缓缓倒入柱内活性炭上部，打开下部阀门，使低聚木糖溶液缓缓下降至高于活性炭面2-3ml处，然后打开蠕动泵，开始用纯水冲洗，柱流速与步骤(3)洗炭时的流速相同，冲洗时间为22-26小时，期间保持柱液面高于活性炭上表面，流出液经苯酚硫酸法显色后从浅黄色至无色后开始取样；(5)洗脱：用乙醇进行梯度洗脱，柱流速与步骤(3)洗炭时的流速相同，自动收集器收集，在整个洗脱过程中乙醇的重量百分浓度要从0至45％以0.1％的速度线性上升，随着乙醇的重量百分浓度的上升，分子量较小的木二糖先被解析下来，然后以木三糖至木七糖的顺序各木糖逐渐被解析下来；(6)检测：将自动收集器收集的各瓶样品与木二糖-木七糖各木糖标准品点在硅胶板，放入层析缸中以正丁醇∶乙酸∶水＝2∶1∶1为展开剂展开，晾干，再展开，再晾干，然后用喷雾器将体积百分数为5％的硫酸喷到硅胶板上，要喷匀，放入通风橱内晾干，再放入电热箱中110℃加热5分钟，将硅胶板取出，将样品和标准品的展开及显色效果进行对比，将各单一组分的最纯的样品分别收集起来进行浓缩；(7)浓缩：由于收集的样品为水、乙醇和低聚木糖的各单一组分，用旋转蒸发仪蒸发出乙醇和水分，各浓缩液放入冰箱冷冻成冰，以便于冻干；(8)冻干：将冷冻成冰的各浓缩液，在容器口用保鲜膜封好，并在保鲜膜上用针或牙签扎几个洞，便于水分扩散到容器外，然后放入冻干机，开启真空泵，打开制冷开关，制冷温度调到-47.5℃，冻干时间为50-72小时，得到各单一样品。(9)纯化：对于收集的产品中纯度小于98％的样品，使用硅胶柱继续分离纯化。