桃潜隐花叶类病毒分子标准样品及其制备方法

摘要

本发明提供一种桃潜隐花叶类病毒分子标准样品及其制备方法，具体包括PLMVd的原料选取、标准样品的制备、均匀性和稳定性检查、定性检定、定值等过程。所述标准样品的制备方法包括：由PLMVd病毒液中提取病毒RNA、RT‑PCR反应扩增并纯化目的基因片段、目的片段的连接转化；回收质粒的步骤。本发明的桃潜隐花叶类病毒标准样品稳定性高、均匀性好，适用于对桃潜隐花叶类病毒进行快速检测确证，为桃潜隐花叶类病毒的检测研究、农药研究、应用研究提供了标准样品的需求，可广泛应用于农业生产及环境中的疫情监控及进出口贸易中该类病毒的监测及检测。使用本发明的标准样品可以实现不同实验室结果的比对，从而保证实验室的质量控制。

主权项

一种桃潜隐花叶类病毒标准样品的制备方法，其特征在于，制备步骤如下：(1)采集感染桃潜隐花叶类病毒的植物组织，液氮研磨；(2)步骤(1)得到的植物组织中提取得到病毒RNA；(3)步骤(2)的病毒RNA作为PCR反应模板，进行RT‑PCR扩增反应，其中PCR反应的正反引物分别为SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2；(4)将步骤(3)的PCR扩增产物经纯化后连接至PGEM‑T载体中，连接产物转化至感受态细胞后，LB平板培养，筛选得到阳性克隆；(5)阳性克隆中提取得到质粒，即为桃潜隐花叶类病毒的标准样品；其中所述感受态细胞为E.coli JM109。