一种水蛭高F值寡肽及其酶解制备方法与应用

摘要

本发明公开了一种水蛭高F值寡肽及其酶解制备方法与应用，制备方法包括：（1）水蛭干体初步清洗除杂，高速粉碎；（2）原料碱预浸泡；（3）碱性蛋白酶Alcalase AF 2.4L结合木瓜蛋白酶双酶水解；（4）采用活性炭粉静态吸附脱除芳香族氨基酸；（5）以凝胶过滤层析柱进一步分离纯化，收集分离产物，冷冻干燥，获得分子量低于2000Da，F值（Fischer ratio，即支链氨基酸与芳香族氨基酸摩尔含量的比值）高于20的水蛭寡肽粉。本发明公开的制备过程简单，选用碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶两种商业用酶，易于工业生产，产率较高，具有一定的抗凝血效果，并为高F值类产品增加了新来源。

主权项

一种水蛭高F值寡肽的酶解制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）将水蛭干燥体用清水洗净，并于去离子水中浸泡8~24h，再于分析纯乙醇中浸泡8~24h，干燥粉碎，得到水蛭干粉，置于‑4~‑20℃冷藏备用；（2）称步骤（1）得到的水蛭干粉，加水溶解，按干粉与水重量比为1~8：100配制悬浊液，调整pH 至8~11，浸泡10~60min，再调节pH至7.5~11，加入碱性蛋白酶，反应温度保持在30~80℃，酶解1~6h；煮沸5~30min，灭酶活，冷却，4000~10000r/min离心5~20min，收集上清液，调节pH至7~10，加入木瓜蛋白酶，反应温度保持在25~80℃，酶解1~6h；煮沸5~30min，灭酶活，冷却，4000~10000r/min离心5~20min，收集上清液，调整pH至2~7，按活性炭重量与上清液体积比0.2~20g：100mL加入活性炭，在25~60℃下吸附30~100min，4000~10000r/min离心5~30min，收集上清液，过凝胶过滤层析，以去离子水洗脱，收集在214nm吸收值大于2，在280nm吸收值小于0.2，分子量在300—1500Da的洗脱液，富集浓缩，冷冻干燥，得到水蛭高F值寡肽。