一种基于IHF蛋白进行基因突变方法

摘要

本申请公开了一种基于IHF蛋白进行基因突变方法，通过设计突变引物在引物重叠区域引入突变，同时应用IHF蛋白代替同源重组酶进行重组克隆。利用分段PCR扩增和全长基因PCR扩增方法获得全长的突变基因，应用IHF介导的同源重组反应在室温下可以进行，并且同源重组效果与市场上存在的试剂盒活性差距不大，重组效率可达到95％以上。突变基因重组克隆测序证明突变成功，说明本发明的基因突变方法的可行性，并且本发明的方法具有操作简单、经济、和保存运输要求条件低等优点，具有种非常大的市场应用潜力。

主权项

一种基于IHF蛋白进行基因突变方法，其特征在于，包括以下步骤：1)对目的基因进行处理：针对目的基因的某些位点进行突变，并将突变后的目的基因进行处理，得到两段具有重叠区域的DNA片段，该重叠区域包括突变位点；重叠区域的DNA片段的长度为15‑25bp；2)设计引物：针对目的基因，设计一对基因全长扩增引物和至少一对突变引入引物；3)突变基因扩增：首先用突变引入引物对两段具有重叠区域的DNA片段进行分段PCR扩增，得到两管PCR产物，然后用全长引物进行PCR扩增得到的全长DNA片段；4)IHF基因重组转化：使用IHF蛋白介导具有突变位点的目的基因与克隆载体发生同源重组转化，其中，具有突变位点的目的基因为步骤3)得到的全长DNA片段；5)转化：在大肠杆菌中进行转化和克隆，得到重组DNA载体，并通过测序验证突变结果。