一种从植物中提取和测定血红素的方法

摘要

本发明公开一种从植物中提取和测定血红素的方法，包括以下步骤：步骤一、采用丙酮与蒸馏水的混合溶液离心分离，去除叶绿素，然后用盐酸、丙酮与蒸馏水的混合溶液离心分离，得到混合提取液，然后再用乙醚进行萃取，浓缩干燥得到干燥的植物血红素，备用；步骤二、采用紫外分光光度计测定574.5nm处的吸光度；步骤三、将步骤二得到的平均吸光度A代入线性回归方程：A=2.6814496C+0.07506221，计算得到稀释倍数C，再根据Ci=0.5C mg/ml，计算出植物叶片中血红素的浓度Ci。本发明提供的从植物中提取和测定血红素的方法能够准确测定植物中的血红素含量，在叶绿素代谢调控机制的研究中发挥重要作用。

主权项

一种从植物中提取和测定血红素的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、植物血红素的提取a.准确称取待测植物的新鲜叶片1g，置于预冷的研钵中，加液氮研磨至粉末状，然后转移至离心管中，加入丙酮与蒸馏水的混合溶液Ⅰ，震荡均匀后离心，弃去上清液，重复向离心产物中加入丙酮与蒸馏水的混合溶液Ⅰ、震荡和离心操作，直至得到的离心产物为无色，得到初级产物，备用；再向得到的初级产物中加入丙酮与蒸馏水的混合溶液Ⅱ，震荡均匀后离心，弃去上清液，重复向离心产物中加入丙酮与蒸馏水的混合溶液Ⅱ、震荡和离心操作，直至得到的离心产物为无色，得到次级产物，备用；所述混合溶液Ⅰ中丙酮所占的比例大于混合溶液Ⅱ中的比例；b.在步骤a得到的次级产物中加入盐酸、丙酮与蒸馏水的混合溶液，震荡均匀后离心，收集上清液，备用；然后向离心得到的沉淀中再次加入盐酸、丙酮与蒸馏水的混合溶液，震荡均匀后离心，收集上清液，合并两次上清液，得到混合提取液，备用；c.向步骤b得到的混合提取液中加入乙醚，混合均匀后加入到分液漏斗中，将分液漏斗多次倒置后静置分层，收集上层溶液，备用；并向下层溶液中再次加入乙醚，混合均匀后加入到分液漏斗中，静置分层后收集上层溶液，合并两次得到的上层溶液，置于分液漏斗中，然后加入与合并的上层溶液等体积的蒸馏水进行洗涤，静置分层后取乙醚层，加入到旋转蒸发仪中浓缩，再将浓缩产物倒入离心管中，用氮气吹干，即得到干燥的植物血红素，备用；步骤二、植物血红素含量测定向步骤一得到的干燥的植物血红素中加入7.44ml蒸馏水和0.48ml 5N NaOH，搅拌至植物血红素溶解后再加入12 ml蒸馏水和4.08 ml 吡啶，再次混合均匀，采用紫外分光光度计测定574.5nm处的吸光度，测量时在样品中加入几滴二硫酸盐和50mmol/L的铁氰化物，取独立的三株以上的植物的叶片进行测定，多次测定求平均值，得到平均吸光度A，备用；步骤三、植物血红素浓度的计算将步骤二得到的平均吸光度A代入线性回归方程：A=2.6814496C+0.07506221，计算得到稀释倍数C，再根据Ci = 0.5C mg/ml，计算出植物叶片中血红素的浓度Ci。