一种扩增柯萨奇病毒A16型的优化工艺方法

摘要

本发明公开了一种扩增柯萨奇病毒A16型的优化工艺方法，该方法以片状纤维为载体，用生物反应器中扩增非洲绿猴肾细胞，在细胞培养阶段用含8v/v％的血清的DMEM培养基，培养细胞第5‑6天换液成无血清DMEM培养基，在病毒接种吸附后使用带3‑5％的血清DMEM培养基，在收获病毒阶段采用无血清培养基添加0.5w/v％的水解乳蛋白，静止再吸附3小时继续培养，同时每24小时左右补充2.0g/L的葡萄糖。该方法具有良好重复性和稳定性，能达到较高的病毒滴度，可减轻后期纯化难度并适应生物制品的要求，具有良好的应用价值，可适用于以片状纤维载体的生物反应器扩增柯萨奇病毒A16型。

主权项

一种扩增柯萨奇病毒A16型的优化工艺方法，其特征在于，以片状纤维为载体，用生物反应器扩增非洲绿猴肾细胞，在细胞培养阶段用含8v/v％的血清的DMEM培养基，培养细胞第5‑6天换液成无血清DMEM培养基，吸附柯萨奇病毒A16型病毒2‑3小时，加入3‑5v/v％胎牛血清，继续培养20小时，弃去全部培养液，并用磷酸缓冲液PBS冲洗去除血清，全部换成无血清DMEM培养基加0.5w/v％水解乳蛋白，静止再吸附3小时利于更多细胞均匀感染病毒，继续培养，同时每24小时左右添加2.0g/L的葡萄糖,采用换液收获的方式，使优化工艺达到较高的病毒滴度。