发明名称 以触核酸为基质之诊断方法
摘要 本发明提供用于检测对象是否患有疾病之方法与套组,该疾病之特征在于具有已知核酸的一个或多个突变。本发明方法包括步骤如下:分离核酸分子、扩大反应、与一个或多个触核酸分子接触(该触核酸分子能特异地切割患有疾病者之标的序列或野生型标的序列)、及检测经扩大片段的切割结果。
申请公布号 TWI227737 申请公布日期 2005.02.11
申请号 TW088104968 申请日期 1999.08.31
申请人 壮生和壮生研究管理有限公司 发明人 欧亚森;傅卡罗;盖莫瑞
分类号 C12Q1/68 主分类号 C12Q1/68
代理机构 代理人 蔡中曾 台北市大安区敦化南路1段245号8楼
主权项 1.一种检测对象是否患有疾病之方法,该疾病之特征在于具有习知核酸的一个突变,该方法包括下列步骤:(a)由对象分离具有核酸分子的样品;(b)(i)将分离样品中的核酸片段扩大,该片段已知含有该患有疾病之对象的突变,及(ii)在适合条件下,令所产生的经扩大片段与触核酸分子接触,该触核酸分子能特异地辨识与切割标的序列,该标的序列存在于(1)具有已知突变之核酸片段中,或(2)对应之野生型核酸片段中,但此两种情形不同时存在,其前提是,步骤(ii)可在步骤(i)之后或同时进行;及(c)检测步骤(b)(ii)中的触核酸分子是否切割经扩大片段,藉此决定该对象是否患有该疾病。2.一种检测对象是否患有疾病之方法,该疾病特征在于具有习知核酸的多个突变,该方法包括下列步骤:(a)由对象分离具有核酸分子的样品;(b)(i)将分离样品中的核酸片段扩大,该片段已知含有该患有疾病之对象的多个突变,及(ii)在适合条件下,令所产生的经扩大片段与多个触核酸分子接触,每个触核酸分子能特异地辨识与切割标的序列,标的序列存在于(1)具有已知突变之核酸片段中,或(2)对应之野生型核酸片段中,但此两种情形不同时存在,其前提是,步骤(ii)可在步骤(i)之后或同时进行;及(c)检测步骤(b)(ii)中的各个触核酸分子是否切割经扩大片段,藉此检测对象是否患有该疾病。3.一种检测对象是否患有疾病之方法,该疾病特征在于具有习知核酸的多个突变,该方法包括下列步骤:(a)由对象分离具有核酸分子的样品;(b)(i)将分离样品中的核酸片段扩大,该片段已知含有该患有疾病之对象的多个突变,及(ii)在适合条件下,令所产生的经扩大片段与多个触核酸分子接触,每个触核酸分子能特异地辨识与切割标的序列,标的序列存在于(1)具有已知突变之一的一个核酸片段中,或(2)对应之野生型核酸片段中,但此两种情形不同时存在,其前提是,步骤(ii)可在步骤(i)之后或同时进行;及(c)检测步骤(b)(ii)中的各个触核酸分子是否切割经扩大片段(此片段包括其代表之标的序列),藉此检测对象是否患有该疾病。4.如申请专利范围第1、2或3项之方法,其中该对象是人类。5.如申请专利范围第1、2或3项之方法,其中该疾病系选自癌症、AIDS及囊性纤维变性。6.如申请专利范围第5项之方法,其中该疾病是癌症。7.如申请专利范围第1、2或3项之方法,其中经扩大之核酸片段是RNA且触核酸分子是DNA或RNA。8.如申请专利范围第1、2或3项之方法,其中经扩大之核酸片段是DNA且触核酸分子是RNA或DNA。9.如申请专利范围第1、2或3项之方法,其中(a)扩大反应系利用聚合链锁反应进行;(b)触核酸分子是10-23DNA;且(c)该聚合链锁反应使用可开启该片段之扩大反应的DNA引子,该引子含有至少一个嘌呤核糖核酸残基,此残基系作为经扩大片段中被10-23DNA辨识与切割之位置的5'端。10.如申请专利范围第9项之方法,其中经扩大片段被DNA辨识且反式切割。11.如申请专利范围第9项之方法,其中(a)聚合链锁反应使用可开启该片段之扩大反应的第二DNA引子,该第二引子包括编码10-23DNA之产基因,故扩大反应后,所产生的经扩大核酸分子包括10-23DNA;且(b)经扩大之核酸片段被该DNA辨识且顺式切割。12.一种用于实施申请专利范围第1、2或3项之方法的套组,其包括(a)触核酸分子,其特异地辨识与切割标的序列,该标的序列存在于(i)具有突变的核酸片段中,该突变已知为一疾病的特征,或(ii)对应之野生型核酸片段中,但此两种情形不同时存在,及(b)核酸试剂,其适用于扩大含有标的序列之核酸片段。13.一种用于实施申请专利范围第9项之方法的套组,其包括(a)10-23DNA,该特异地辨识与切割标的序列,该标的序列存在于(i)具有突变的核酸片段中,该突变已知为一疾病的特征,或(ii)对应之野生型核酸片段中,但此两种情形不同时存在,及(b)DNA引子,其在聚合链锁反应条件下,适用于开启该片段的扩大反应,该引子含有至少一个嘌呤核糖核酸残基,此残基系作为经扩大片段中被10-23DNA辨识与切割之位置的5'端。14.一种用于实施申请专利范围第11项之方法的套组,其包括(a)第一DNA引子,其包括编码10-23DNA之产基因,该10-23DNA特异地辨识与切割标的序列,该标的序列存在于(i)具有突变的核酸片段中,该突变已知为一疾病的特征,或(ii)对应之野生型核酸片段中,但此两种情形不同时存在,该第一引子在聚合链锁反应条件下,适用于开启该片段的扩大反应;及(b)第二DNA引子,其在聚合链锁反应条件下,适用于开启该片段的扩大反应,该第二引子含有至少一个嘌呤核糖核酸残基,此残基系作为经扩大片段中被10-23DNA辨识与切割之位置的5'端;因此扩大反应后,(i)所产生的经扩大核酸分子包括10-23DNA,且(ii)经扩大核酸片段被该DNA辨识且顺式切割。
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