具有降低的吸附作用和增加的水解作用的卡氏枯草杆菌蛋白酶变异体

摘要

本发明涉及具有野生型卡氏枯草杆菌蛋白酶氨基酸序列的修饰氨基酸序列的卡氏枯草杆菌蛋白酶变异体,野生型氨基酸序列包括第一环区域、第二环区域、第三环区域、第四环区域、第五环区域和第六环区域;其中,修饰的氨基酸序列在一个或多个环区域中的特定标记的位点上含有与野生型卡氏枯草杆菌蛋白酶不同的氨基酸(即取代),从而与野生型卡氏枯草杆菌蛋白酶相比,卡氏枯草杆菌蛋白酶变异体具有对不溶解底物降低的吸附作用和增加的水解作用。本发明还涉及编码这种卡氏枯草杆菌蛋白酶变异体的基因。本发明还涉及含有这种卡氏枯草杆菌蛋白酶变异体的用于洗涤各种表面的组合物。

主权项

1.具有卡氏枯草杆菌蛋白酶野生型氨基酸序列的修饰氨基酸序列的卡 氏枯草杆菌蛋白酶变异体，野生型氨基酸序列包括第一环区域、第二环 区域、第三环区域、第四环区域、第五环区域和第六环区域；其中修饰 的氨基酸序列在一个或多个环区域内的一个或多个位点上含有取代基； 其中 A.当取代发生在第一环区域中时，取代发生在位点58、59、60、 61、62、64或65的一个或多个上；其中 a.当取代发生在位点58时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly、Pro或Ser； b.当取代发生在位点59时，取代氨基酸是Glu； c.当取代发生在位点60时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser； d.当取代发生在位点61时，取代氨基酸是Asp、Gln、Glu或Ser； e.当取代发生在位点62时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser； f.当取代发生在位点64时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser；和 g.当取代发生在位点65时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly、Pro或Ser； B.当取代发生在第二环区域中时，取代发生在位点94、95、96、 97、98、99、100、101、102、103、104、105或106的一个或 多个上；其中 a.当取代发生在位点94时，取代氨基酸是Ala、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Met、Pro、Ser或Thr； b.当取代发生在位点95时，取代氨基酸是Ala、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Ile、Met、Pro、Ser、Thr或Val； c.当取代发生在位点96时，取代氨基酸是Asp、Gln、Glu、Ser； d.当取代发生在位点97时，取代氨基酸是Asp或Glu； e.当取代发生在位点98时，取代氨基酸是Asp或Glu； f.当取代发生在位点99时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser； g.当取代发生在位点100时，取代氨基酸是Asp或Glu； h.当取代发生在位点101时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser； i.当取代发生在位点102时，取代氨基酸是Asp或Glu； j.当取代发生在位点103时，取代氨基酸是Ala、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Ser、Thr或Val； k.当取代发生在位点104时，取代氨基酸是Asp或Glu； l.当取代发生在位点105时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser；和 m.当取代发生在位点106时，取代氨基酸是Ala、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Leu、Met、Pro、Ser、Thr或Val； C.当取代发生在第三环区域中时，取代发生位点125、126、127、 128、129、130、131或132的一个或多个上；其中 a.当取代发生在位点125时，取代氨基酸是Ala、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Ile、Met、Pro、Ser、Thr或Val； b.当取代发生在位点126时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser； c.当取代发生在位点127时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser； d.当取代发生在位点128时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly、His、Pro、Ser或Thr； e.当取代发生在位点129时，取代氨基酸是Asp或Glu； f.当取代发生在位点130时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser； g.当取代发生在位点131时，取代氨基酸是Asp或Glu；和 h.当取代发生在位点132时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly、Pro或Ser； D.当取代发生在第四环区域中时，取代发生在位点153、154、155、 156、157、158、159、160、161、162、163、164、165或166 的一个或多个上；其中 a.当取代发生在位点153时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser； b.当取代发生在位点154时，取代氨基酸是Asp、Gln、Glu或Ser； c.当取代发生在位点155时，取代氨基酸是Asp或Glu； d.当取代发生在位点156时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser； e.当取代发生在位点157时，取代氨基酸是Asp、Gln、Glu、Ser； f.当取代发生在位点158时，取代氨基酸是Asp或Glu； g.当取代发生在位点159时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser； h.当取代发生在位点160时，取代氨基酸是Asp或Glu； i.当取代发生在位点161时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly、Pro或Ser； j.当取代发生在位点162时，取代氨基酸是Asp、Gln、Glu或Ser； k.当取代发生在位点163时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly、Pro或Ser； l.当取代发生在位点164时，取代氨基酸是Ala、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Met、Pro、Ser、Thr或Val； m.当取代发生在位点165时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser；和 n.当取代发生在位点166时，取代氨基酸是Ala、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Ser、Thr或Val； 和 E.当取代发生在第五环区域中时，取代发生在位点186、187、188、 189或190一个或多个上；其中 a.当取代发生在位点186时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly、His、Pro、Ser或Thr； b.当取代发生在位点187时，取代氨基酸是Asp或Glu； c.当取代发生在位点188时，取代氨基酸是Ala、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Ser、Thr、Tyr 或Val； d.当取代发生在位点189时，取代氨基酸是Asp或Glu； e.当取代发生在位点190时，取代氨基酸是Asn或Glu；和 F.当取代发生在第六环区域中时，取代发生在位点199、200、201、 202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、 213、214、215、216、217、218或219的一个或多个上；其中 a.当取代发生在位点199时，取代氨基酸是Asn、Asp、gln、Glu、 Gly、His、Pro、Ser或Thr； b.当取代发生在位点200时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly或Ser； c.当取代发生在位点201时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser； d.当取代发生在位点202时，取代氨基酸是Asp、Asp、Gln、Glu、 Gly、His、Pro、Ser或Thr； e.当取代发生在位点203时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser； f.当取代发生在位点204时，取代氨基酸是Ala、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Met、Pro、Ser或Thr； g.当取代发生在位点205时，取代氨基酸是Ala、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Ser、Thr或Val； h.当取代发生在位点206时，取代氨基酸是Asp或Glu； i.当取代发生在位点207时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly、Pro或Ser； j.当取代发生在位点208时，取代氨基酸是Ala、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Ser、Thr或Val； k.当取代发生在位点209时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly或Ser； l.当取代发生在位点210时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly、Pro或Ser； m.当取代发生在位点211时，取代氨基酸是Asp、Gln、Glu或Ser； n.当取代发生在位点212时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly、Pro或Ser； o.当取代发生在位点213时，取代氨基酸是Ala、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Ile、Leu、Met、Pro、Ser、Thr或Val； p.当取代发生在位点214时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly、His、Pro、Ser或Thr； q.当取代发生在位点215时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly、Pro或Ser； r.当取代发生在位点216时，取代氨基酸是Ala、Asn、Asp、Cys、 Gln、Glu、Gly、His、Ile、Met、Pro、Ser、Thr或Val； s.当取代发生在位点217时，取代氨基酸是Asp、Gln、Glu或Ser； t.当取代发生在位点218时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Pro或Ser；和 u.当取代发生在位点219时，取代氨基酸是Asn、Asp、Gln、Glu、 Gly、Pro或Ser； 从而，与野生型卡氏枯草杆菌蛋白酶相比较，卡氏枯草杆菌蛋白酶变 异体对不溶解底物具有降低的吸附作用和增加的水解作用。