| 主权项 |
1.一种由非癒合体材料在悬浮培养物中获得体细胞胚的方法,该方法包括:(i)将非胡萝卜属外植体材料培养于一种液体培养基中,该培养基含有有效量的足以促使诱导出原胚形成群(PEM)形成的生长素或生长素混合物;(ii)藉由在一种含有生长素的液体培养基中培养所述之PEMs,俾增加所诱发的PEMs的数目;(iii)收集由步骤(ii)中获得的PEMs并将它们置于不含生长素的液体培养基中以诱发体细胞胚的形成,其中所述之不含生长素的液体培养基包括一种去除生长素的液体培养基,其中生长素的残量程度系存在但不干扰诱发体细胞胚的形成;(iv)诱发体细胞胚的形成;以及(v)收集由步骤(iv)中之诱发的胚所产生的体细胞胚,其中体细胞胚在步骤(v)所收集者具有基本上相同于在悬浮培养物中非癒合体起始材料的倍性水准,而所述之倍性水准为二倍体或者为四倍体。2.如申请专利范围第1项所述之方法,其中倍性水准系为二倍体。3.如申请专利范围第1项所述之方法,其中倍性水准系为四倍体。4.如申请专利范围第1项所述之方法,其中在步骤(iii)而使用的PEMs为约1.0毫米或其以下之直径者。5.如申请专利范围第1项所述之方法,其中在步骤(iii)所使用的PEMs为约0.5毫米或其以下之直径者。6.如申请专利范围第1项所述之方法,其中至少约5%可存活的PEMs包括获自步骤(iii)的PEMs。7.如申请专利范围第1项所述之方法,其中在步骤(i)之液体培养基进一步包括碳水化合物能源的浓度在约15克/升和90克/升之间。8.如申请专利范围第7项所述之方法,其中碳水化合物能源的浓度在约20克/升和60克/升之间。9.如申请专利范围第8项所述之方法,其中碳水化合物能源系选自蔗糖、卜萄糖和棉子糖。10.如申请专利范围第1项所述之方法,其中诱发的PEMs系在含有生长素的液体悬浮液之振动混合器中振动。11.如申请专利范围第10项所述之方法,其中振动混合器是在垂直的平面上振动,其中侧面的或水平的运动保持在最低値。12.如申靖专利范围第1项所述之方法,其中外植体材料系衍自原生质体、茎、叶、花瓣、下胚轴区、顶端分生组织、合子胚、块茎、维管束、中柱鞘、子房或花药丝。13.如申请专利范围第1项所述之方法,其中外植体材料系为双子叶植物。14.如申请专利范围第1项所述之方法,其中外植体材料系为单子叶植物。图式简单说明:第一图:系在四种混合器中,于各混合器之每公升单位中所产生的PEMs比较图。 |
