一种高效安全提取动物肌肉组织DNA的方法

摘要

本发明公开了一种简便、安全、快速提取动物肌肉组织DNA的方法，它是将猪肉、羊肉、牛肉和鸡肉等，清水洗净后，剔去动物组织中的结缔组织和脂肪，剪成约200mg的小块，放入液氮，迅速研磨，直至粉末状，取100mg放入2mL离心管，通过SDS裂解、异丙醇沉淀、吸附柱纯化提取得到DNA，可直接用于PCR扩增。本发明采用的DNA提取方法，2小时内即可完成样品DNA提取的全过程。所提取的DNA质量标准满足了后续PCR扩增的要求，同时避免了传统SDS法或异硫酸氰胍法提取过程中各种有机试剂对实验人员的危害，而且时间上也得到了很大的提升，更适合于动物源性成分鉴定过程中高效快速提取样品DNA的目的，具有高效、快速、低成本、操作简便、无毒安全等优势。

主权项

一种高效安全提取动物肌肉组织DNA的方法，其特征在于它按如下步骤进行：(1)取待测动物肌肉组织样本清水洗净后，剔去动物组织中的结缔组织和脂肪，剪成约200mg的小块，放入用液氮预冷的研钵中，然后缓缓的向研钵中加入液氮，迅速研磨，直到样品成细微的粉末状为止，取100mg加入2mL灭菌离心管中；(2)加入500μL SDS裂解液和6μL蛋白酶K，65℃水浴60min，期间不停颠倒混匀；(3)水浴后13200rpm/min，离心5min；小心地将上层水相转入一个新的离心管中，加入0.8倍异丙醇；将混匀的液体转入吸附柱中，13200rpm/min，离心30s，弃掉废液；(4)向吸附柱中加入70％乙醇，13200rpm/min，离心30s，弃掉废液，重复此步骤一次；(5)将吸附柱放回收集管中，13200rpm/min，离心2min，倒掉废液；将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的乙醇；将吸附柱转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间位置悬空滴加100μL的洗脱缓冲液TE，室温放置2‑5min，13200rpm/min，离心2min，所得溶液即为DNA。