| 摘要 |
1. Плазмидный вектор pET-pPsLTP, несущий нуклеотидную последовательность SEQ ID No. 2 для экспрессии в клетках Escherichia coli пищевого аллергена гороха посевного Pis s 3, имеющего аминокислотную последовательность SEQ ID No. 1, в составе гибридного белка His8-TrxL-Pis s 3, и состоящий из двух фрагментов ДНК:- BglII/XhoI-фрагмента, содержащего промотор транскрипции Т7 РНК-полимеразы, lac-оператор, участок связывания рибосомы и участок, кодирующий аффинную метку, белок тиоредоксин и аллерген Pis s 3;- BglII/XhoI-фрагмента плазмиды pET31b(+), содержащего терминатор транскрипции Т7 РНК-полимеразы, сайт инициации репликации, ген β-лактамазы и ген lac-репрессора (lacI).2. Штамм бактерии Escherichia coli BL21(DE3)Star/pET-pPsLTP - продуцент гибридного белка His8-TrxL-Pis s 3, получаемый путем трансформации клеток родительского штамма BL21(DE3)Star плазмидным вектором pET-pPsLTP (см. п. 1).3. Способ получения пищевого аллергена Pis s 3, включающий экспрессию гена гибридного белка His8-TrxL-Pis s 3 в штамме-продуценте Escherichia coli BL21(DE3)Star/pET-pPsLTP (см. п. 2), лизис клеток, аффинную очистку гибридного белка His8-TrxL-Pis s 3 на металлохелатном носителе, расщепление гибридного белка His8-TrxL-Pis s 3 бромцианом по остатку метионина, введенному между последовательностями аллергена Pis s 3 и тиоредоксина А, повторную металлохелатную очистку и очистку целевого пептида с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. |
