| 摘要 |
<p>Un procédé à plusieurs étapes permet de détecter les transcripts uniques de gènes aberrants caractéristiques d'une anormalité génomique cellulaire ciblée dans un échantillon de tissu. Initialement, on isole l'ARN ou l'ARN-m cellulaire de l'échantillon de tissu afin d'y rechercher la présence d'une anormalité génomique. Ensuite on mélange l'ARN ou l'ARNm cellulaire total avec au moins un oligonucléotide d'ADN synthétique complémentaire de la séquence unique d'ARN de l'anormalité génomique cellulaire ciblée que l'on veut détecter. Ce mélange se fait dans des conditions qui facilitent la formation d'hétéroduplexes d'ADN-ARN à double brin lorsqu'un brin de l'oligonucléotide d'ADN synthétique est complémentaire du brin d'ARN obtenu dans l'échantillon de tissu. Ces conditions comprennent la durée, la concentration saline, la température et un pH égal à 10. L'oligonucléotide d'ADN synthétique a de préférence plusieurs centaines environ de nucléotides en longueur, surtout entre 60 et 150 nucléotides en longueur. Dans un mode préférentiel de réalisation, on peut appliquer ce procédé pour détecter des cellules résiduelles de la leucémie myélogène chronique avec leur chromosome caractéristique dit de Philadelphie (Ph1). Dans ce cas, la première substance de prétraitement est bcr Ex III (+) ou bcr Ex II (+), de préférence un mélange de bcr Ex III (+) et de bcr Ex II (+). Dans certains cas, la deuxième substance de prétraitement peut également être un mélange de deux substances différentes de prétraitement, notamment lorsque le point de rupture dans le deuxième élément chromosomique de translocation caractérisitque d'un néoplasme est variable. Lorsque l'on veut détecter des cellules résiduelles de la leucémie myélogène chronique, la deuxième substance de prétraitement est de préférence abl (-).</p> |
