发明名称 完整血球计数一步骤法
摘要 本发明包括血检体中一种或多种细胞数目绝对计数之侦测及计算之一步骤法。此方法采用一种包括一种或多种细胞标识物,一种萤光微粒及一种固定剂之混合物之试剂。此试剂可与未溶血之全血混合并藉流体细胞测定法加以分析。
申请公布号 TW183275 申请公布日期 1992.05.01
申请号 TW080106222 申请日期 1991.08.07
申请人 贝登狄金森公司 发明人 安东尼J.华德;汤玛士J.麦柯里诺;戴特J.雷克坦华德
分类号 G06M11/02 主分类号 G06M11/02
代理机构 代理人 郑自添 台北巿敦化南路二段七十七号八楼
主权项 1.一种经由流体细胞计数法测定全血或骨髓检体中一锺或多种细胞族群之绝对计数之方法,包括下列步骤:(a)将检体加入含稀释剂之智子中,此稀释剂包含一种或多种糊胞标记使此检体中每一种耦胞族群都可鞍细胞标记标识及已知数目之萤光微粒:(b)设定萤光制动器以包括实质上所有被计数之微粒及糊胞族群:(c)设定1或多个萤光门娴以区则各个耦胞标记及微粒:(d)计算得自步骤(c)之符合或超过萤光制动器之细胞数目:及(e)计算得自步骤(d)之每一个浆光门搁之每个微粒之细胞数目并乘上各个源于单位体损细胞之绝对计数之微粒之浓度:其一或多种细胞标记包括一种免疫萤光标记,此免疫萤光标记更包括贴结于萤先色素之单源抗体:单源抗体及选自抗-CD4,抗-CD8,抗-CD3,-抗CDl4,抗-CD15,及抗-CD45单源抗体;萤光色素乃选自藻胆红蛋白,萤光素衍生物,蔷薇红Pthalocyanine衍生物,包被素叶绿素错合物及香豆素衍生物:其中微粒乃选择自包括固定难红血球,含萤光素之微脂体,香豆素珠粒,萤光素珠粒,香薇红珠粒,固定萤光细胞,萤光细胞核,微生物,结合有萤光色素之表示标识珠粒:其一种或多种糊胞标记包括萤光附结剂:其萤光附结剂乃选自核酸染料,7-胺-放线菌素D, 唑橙,硫黄素t,lds-751及啶橙。2.如申请专利范围第1项之方法,其中,使用未熔血全血检体。3.一种经由流体细胞计数法测定未熔血全血检体细胞族群之绝对计数之方法,包括下列步骤:(a)将检体加入今稀释剂之簪子中,此稀释剂包括等张锾冲液,一锺免疫盛光标记使检体中之细胞可彼此免疫萤光标记标识,一种固定剂及一种已知浓度在2个萤光频道具有自体萤光性之微粒且再者其第一频道徽粒之自体萤光性对第二频道者之比率与第一频道及第二频道中免疫萤光标记发射萤光之比率为可辨的:(b)于第二萤光频道中设定萤光剂制动器以包括素质上敔计数所有微粒及细胞族群:(c)计数符合或超过经由流体细胞计数法第2萤光频道之萤光制动器之所有微粒及免疫萤光标识细胞;(d)于第1及第2萤光频道设定几光频道设定萤光门栏以分辨免疫萤光标记及微粒,及(e)计算得自步骤(f)之每个微粒的细胞数目并乘上源于单位体积之绝对计数之微粒浓度:而色疫萤光标记萸包括贴结于萤先色素之单源抗体;单源抗体乃选自抗-CD4,抗-CD8,抗-CD3,一CDl4,一CDl5,及抗-CD45单源杭体;萤光色素乃选自藻胆红蛋白,萤光素衍生物,蔷薇红,Pthalocyanlne衍生物,包被素叶绿素错合物及香豆素衍生物;其中微粒乃选择自包括固定鸡红血球,含萤光素之微脂体,香豆素珠粒,萤光素珠粒,磐薇红珠粒,固定萤光细胞,萤光细胞核,微生物,结合有萤光色素之表示标识珠粒:其一种或多种细胞标记包括萤光附结剂:其萤光附结剂乃选自核酸染科,7一胺一放线菌素D, 唑橙,硫黄素D,LDS一751及咬橙。4.一种经由流体细胞计数法测定全血检体中CD4淋巴球之绝对讦数之方法,包括下列步骤:(a)将检体加入含有结合以藻红质之抗-CD4单源抗体,仲甲醒及已知溅度之2 um自体萤光微粒之稀释剂之管子:(b)于第二烛光频道设定一个萤光制动器以包括至少99%之所有微粒及CD4+琳巴球;(c)于第1及第2萤光频道设定萤光门斓以分辨结合已标识CD4+淋巴球之藻红质萤光与微粒之自体萤光:(d)计数得自步骤(c)之CD4+淋巴球汲欤粒子数目:及(e)计算得自步骤(d)之每个微粒之CD4+琳巴球数目并乘上源于单位体积CD4+淋巴球之绝对计数之微粒浓度:而色疫萤光标记更包括贴结于萤先色素之单源抗体,单源抗体乃选自抗-CD4,抗-CD8,抗一CD3,抗-CDl4,抗-CDI5,及抗-CD45 单源抗体:萤光色素乃选自难胆红蛋白,萤光素衍生物,舞薇红,Pthalocyanlne衍生物,包皴素叶绿素错合物及香豆素衍生物;其中微粒乃选择自包括固定难红血球,含萤光素之微脂体,香豆素珠粒,萤光素珠粒,蔷薇红珠粒,.固定檗光细胞,萤光细胞模,微生物,弦合有萤光色素之表示标识珠粒;其一种或多种细胞标记包括萤光附结剂:其残光附结剂乃选自核酸染料,7一胺一放线菌素D,晓唑橙,硫叶素D,LDS一751及咬橙。5.一种用以染未溶血全血之熔液,其包括一稀释剂,此稀铎剂再包括一种或多种萤光标识之单源抗体,一种固定剂及一种萤光仿粒;而免疫萤光标记更包括贴弦于萤先,色素之单源抗体: 单源抗体乃选自抗-CD4,抗-CD8,抗-CD3,抗-CDl4,抗-CDl5,及抗-CD45,单源抗体:萤光色素乃选自标胆红蛋白,萤光素术生物,眷薇红,Pthalocyanlne衍生物,包皴素叶绿素错合钩及香豆素术生物:其中微粒乃选挥自包括固定难红血球,含萤光素之脂体,香豆素珠粒,萤光素珠粒,蔷薇红珠粒,固定萤光细胞,萤光细胞核,微生物,结合有萤光色素之表示标识珠粒;其一种或多种细胞标记包括檗光附结剂:其萤光附结剂乃选自模酸染料,7一胺一放线菌素D, 唑橙,硫荪素D,LDS一751及 咬橙。6.如申请专利范围第5项之熔液,其中抗体为抗-CD4,单源抗体。7.如申请专利范围第5项之熔液,其中残光标织为臻红质。8.如申请专利范围第5项之溶液,其中固定剂为仲甲醒。9.一种用以未熔血全血检体中CD4+及CD8+琳巴球之熔液,此熔液包括结合以萤光色素之抗-CD4单源抗体,结合以第二萤光色素之抗-CD8单源抗体,结合以第三萤光色素之抗-CD3单源杭体,仲甲醒及一种自体萤光珠粒。
地址 美国