一种坛紫菜核心种质库的构建方法

摘要

一种坛紫菜核心种质库的构建方法，涉及坛紫菜。包括以下步骤：1)坛紫菜种质的收集和纯化；2)提取坛紫菜各种质品系基因组DNA；3)基于SSR分子标记的坛紫菜种质品系遗传多样性分析；4)计算各种质品系间遗传相似性系数；5)逐步聚类取样构建核心种质库。得到的核心种质库能以最少的样品数量最大程度地保存原种质的遗传多样性，从而简化后续坛紫菜杂交育种时进行亲本组配的环节，提高育种效率和育种成效。

主权项

一种坛紫菜核心种质库的构建方法，其特征在于包括以下步骤：1)坛紫菜种质的收集和纯化，具体方法如下：(1)将收集到的坛紫菜种质样品，取单株叶状体，表面清洗后阴干和冷冻，将冷冻后的藻体取出，再次清洗后静水弱光复苏；(2)取藻体的营养组织块，置于葡萄糖溶液中浸泡，然后将藻体块剪成小块，放置于海螺酶溶液中酶解，酶解期间观察细胞解离状况，当在显微镜下观察到藻体碎片游离出大量单细胞或多细胞团时，过滤细胞液，滤液离心后弃上清液保留沉淀，洗涤后再重复离心；(3)将收集到的细胞放入海水中黑暗培养后，再继续培养20～30d，将培养皿中的丝状体吸出，即获得纯系种质丝状体，再将纯系种质丝状体静水培养，进行保种；(4)将第(3)部分静水培养后的纯系种质丝状体切碎，然后黑暗静置培养1d，第2d更换MES培养液后恢复正常光照静置培养，培养期间每15d更换MES培养液，直到获得足够用于基因组DNA提取的丝状体；2)提取坛紫菜各种质品系基因组DNA；3)基于SSR分子标记的坛紫菜种质品系遗传多样性分析，具体方法如下：采用经过筛选的30对SSR引物对所有的种质品系进行遗传多样性分析，并按照分子量大小，对SSR标记所扩增的条带进行记录，有条带记为1，没有条带则记为0；所述30对SSR引物的序列见表1；表14)计算各种质品系间遗传相似性系数(GS)，具体方法如下：采用Nei&Li相似性系数GS，计算公式为GS(NL_cij)＝2a/((a+b)+(a+c))，公式中a为两个品系共有的条带数；b、c为第i和第j品系各自的条带数；5)逐步聚类取样构建核心种质库。