发明名称 |
利用CRISPR‑Cas9系统敲除鱼类MC4R基因的育种方法 |
摘要 |
本发明提供一种利用CRISPR‑Cas9系统敲除鱼类MC4R基因的育种方法,包括MC4R基因打靶位点的确定、gRNA的制备、体外显微注射与敲除验证、MC4R基因敲除鱼的筛选、杂合鱼的培育等步骤。该育种方法适用于所有的经济鱼类,通过敲除鱼类的MC4R基因,从而实现鱼类的快速生长育种。与传统的育种方法相比,本发明方法具有准确性高、成本低、得到纯系时间短的特点。与转基因育种相比,由于基因敲除是使鱼本身的基因功能缺失,不会引入外来基因,因此,不存在转基因安全问题。 |
申请公布号 |
CN106191114A |
申请公布日期 |
2016.12.07 |
申请号 |
CN201610618743.4 |
申请日期 |
2016.07.29 |
申请人 |
中国科学院重庆绿色智能技术研究院 |
发明人 |
裴得胜;王超 |
分类号 |
C12N15/85(2006.01)I;A01K67/027(2006.01)I |
主分类号 |
C12N15/85(2006.01)I |
代理机构 |
上海光华专利事务所 31219 |
代理人 |
尹丽云 |
主权项 |
一种利用CRISPR‑Cas9系统敲除鱼类MC4R基因的育种方法,其特征在于,包括如下步骤:1)MC4R基因打靶位点的确定:选择MC4R基因打靶位点序列;2)gRNA的制备:设计含有MC4R基因打靶位点序列的上游引物以及与其匹配的下游引物,通过体外转录得到gRNA;3)体外显微注射:鱼产卵后,收集受精卵,将gRNA和Cas9RNA注射进入鱼的受精卵,对注射的受精卵进行孵化培育;4)MC4R基因敲除鱼的筛选:通过剪尾检测选出步骤3)中MC4R基因敲除阳性的鱼。 |
地址 |
400714 重庆市北碚区方正大道266号 |