一种C群脑膜炎球菌高密度产糖的方法

摘要

本发明公开了一种C群脑膜炎球菌高密度产糖的方法，它包括以下步骤：S1.开启菌种及传代；S2.种子罐培养；S3.发酵；S4.纯化荚膜多糖。本发明建立了一套使用发酵罐高密度培养C群脑膜炎球菌产荚膜多糖的方法，可以将C群脑膜炎球菌培养达到较高的浓度，增加荚膜多糖的产量；同时控制发酵液中的核酸和蛋白等杂质含量处于较低水平，较低的蛋白含量减少了苯酚抽提去除杂蛋白的次数，降低了后续纯化过程中的苯酚用量，减少对环境的污染，降低生产成本；本发明在现有工艺的基础上提高了约100%的荚膜多糖产量，并且荚膜多糖经检验符合国家质量标准，部分杂质的含量低于国家药典的质量标准。

主权项

一种C群脑膜炎球菌高密度产糖的方法，其特征在于，它包括以下步骤：S1. 开启菌种及传代：开启C群脑膜炎球菌菌种传代至氯化血红素流行性脑膜炎半综合培养基上，放入二氧化碳细胞培养箱中，35～37℃培养16～24h，经扩增培养，将菌种量放大；S2. 种子罐培养：将放大后的C群脑膜炎球菌种子接种到种子罐中，恒温培养4～8h，所述培养的条件为：温度35～37℃，搅拌转速150～250rpm，通气量为10～20L/min，培养至种子罐中菌浓度OD₆₀₀≥2.0时结束培养，转种到发酵罐；S3. 发酵：将种子罐中的细菌接种到发酵罐中进行发酵，所述发酵的条件为：温度35～37℃，搅拌转速200～300rpm，通气量20～50L/min，发酵过程中加入葡萄糖溶液，当细菌生长至对数生长末期或稳定生长期前期时，停止发酵；S4. 纯化荚膜多糖：将发酵后的细菌采用甲醛杀菌后收集荚膜多糖并纯化，即制得精制得C群脑膜炎球菌多糖。