发明名称 一制备与内毒素有关之疾病的疫苗与血清和制备除去毒性之内毒素和突变细菌之方法以及该疾病免疫与治疗之方法
摘要 组合疫苗,制法及疗法以保护动物免于革兰氏阴性菌病。此疫苗包括得自分类学肠细菌科之已杀死之细菌突变体悬浮液,B淋巴球增生性免疫调理剂,及蛋白质与脂肪结合佐剂。治疗病畜用超免疫血清之制法为以组合疫曲免疫接种给予者动物,然后制得含抗原专一性抗体之凝块血清。该突变体为ATCC 53000且系由离子化幅射肠炎焊菌而产生者。免疫调理剂为已去毒化之脂多醣萃,可用于多种抗原以增进初级免疫反应。
申请公布号 TW155171 申请公布日期 1991.04.01
申请号 TW074101382 申请日期 1985.04.03
申请人 密苏里大学评议会 发明人 哈洛德E.贾纳;罗纳德F.史布罗斯
分类号 C12K 主分类号 C12K
代理机构 代理人 恽轶群 台北巿松山区南京东路三段二四八号七楼;蔡坤财 台北巿松江路一四八号十二楼之三
主权项 1﹒一种广效疫苗,系作为牛和乌种系对革兰氏阴性菌疾病之免疫用,包括:(a)一具至少1X107细菌之得自分类学肠细菌科之已杀死无0-碳水化合物侧链细菌突变体之悬/浮液;(b)一对B─淋巴球具特殊倾向之去毒内毒素免疫调理剂,其量为约100至约4000微克,系用来提高抗体反应以及提高广范围免疫特殊性的制备;(C)一具有高亲脂性和高亲蛋白质亲和力的载剂,以确保均匀的组份悬浮液相延长的抗原释放。2﹒依据申请专利范围第1项所述之疫菌,其中该细菌突变体包括肠炎杆菌的已杀死的无0─碳水化合物侧链细菌突变体之悬浮液。3﹒依据申请专利范围第1或2项所述之疫菌,其中该细菌突变体系ATCCNO﹒53000。4﹒依据申请专利范围第1项所述之疫菌,其中该免疫调理剂包括非毒性之脂肪A。5﹒依据申请专利范围第4项所述之疫菌,其中该免疫调理剂包括一去毒性的内毒素。6﹒依据申请专利范围第5项所述之疫菌,其中该免疫调理剂包括一类内毒素。7﹒依据申请专利范围第1或2项所述之疫菌,其中该蛋白质和脂肪结合剂系选自由脂肪酸、油基和矾基佐剂所组成之族中。8﹒依据申请专利范围第7项所述之疫菌,其中该蛋白质和脂肪结合剂包括一具有1﹒5%体积之三氧化二铝的蛋白质和脂肪佐剂9﹒依据申请专利范围第1项所述之疫菌,其中该蛋白质和脂肪结合载剂的量系在该细菌突变体中每1﹒5毫克蛋白质至少1毫克载体者。10﹒一制备对抗革兰氏阴性菌病免疫用疫曲之方法,其包括组合一已杀死的无0─碳水化合物侧链细菌突变体之悬浮液以及一具有高亲脂和高蛋白质亲和力之蛋白质与脂肪结合载剂以确保均一成分之悬浮液以及延长的抗原释放。11﹒依据申请专利范围第10项之方法,其中该细菌突变体系得自分类学肠细菌科。12﹒依据申请专利范围第10项之方法,其中该细菌突变体系得自肠炎杆菌。13﹒依据申请专利范围第l0项之方法,其中该细菌突变体系与一具有对B─淋巴球增生倾向而有高位准之高抗原亲和力与活性的中和及调理抗体的免疫调理剂组合。14﹒依据申请专利范围第13项之方法,其中该免疫调理剂系去毒脂多醣。15﹒依据申请专利范围第10项之方法,其中所述细菌突变体之制备包含:(1)对无菌觉富羹接种以细菌次培养突变体,较好为得自分类学肠细菌科之非0─碳水化合物侧链细菌突变体(2)将该羹于约37℃有氧培育以得最大细菌质块;(3)以杀菌剂如硫汞柳(methiolate)杀死该菌;(4)洗涤该菌,较好使用无菌非发热性盐水;及(5)调配该菌成预选浓度。16﹒依据申请专利范围第10或15项之方法,其中无菌丰富羹被接种以肠炎杆菌细菌次培养突变体,较好是已杀死之悬浮液。17﹒依据申请专利范围第13项之方法,其中该免疫调理剂之型备包含:(1)将革兰氏阴性菌内毒素与啶一甲酸溶液混合,较好呈2:1浓度;(2)藉整体回流蒸馏甲基化所述混合物;(3)以醇沈淀该甲基化内毒素混合物;(4)将醇与甲基化内毒素混合物离心;及(5)以蒸馏混合沈淀至预选之内毒素浓度。18﹒根据上述专利范围第17项之方法,其中所述离心步骤之沈淀产物悬浮于醇中并于所述最终混合步骤前再度离心。19﹒根据上述专利范围第13项之方法,其中该免疫调剂系由包含无毒脂肪A,去毒内毒素及类内毒素之组中选取。20﹒根据上述专利范围第19项之方法,其中该免疫调剂存在量至少为100微克,较好100至4000微克。21﹒根据上述专利范围第13项之方法,其中该细菌突变体与免疫调理剂组合物悬浮于高亲和力亲脂肪及亲蛋白质载剂中,如三氧化二铝而其量足以吸收细菌突变体之蛋白质部分及免疫调理剂之脂肪部分者。22﹒根据上述专利范围第10,13或21项之方法,其中该蛋白质及脂肪结合载剂系由包含脂肪酸,油基与矾基佐剂之组中选取,其较好包含1﹒5%体积之三氧化二铝23﹒一种制备治疗革兰氏阴性菌病用超免疫血清之方法,其步骤包:(1)将细菌变体,免疫调理用及蛋白质与脂肪结合载剂组合成疫菌;(2)以所述疫菌免疫接种给予者动物以回应于该疫菌产生具抗原特殊性抗体:(3)由该给予者动物采集全血;及(4)由该全血形成含该具抗原特殊性抗体之凝结血清。24﹒一种制备免疫调理剂之方法,其特征在于:(1)以三氯醋酸萃取细菌;(2)以超高远离心回收脂多醣;(3)使用啶一甲酸以甲基化将该脂多醣去毒化;(4)回收冷冻乾燥的已去毒化之脂多醣;以及(5)藉由该回收的冷冻乾燥的去毒化脂多糖诱发T─及B─淋巴细胞的细胞分裂之能力评估其免疫发生性。25﹒依据申请专利范围第24项之方法,其中该超高速离心是在28,000Xg下。26﹒依据申请专利范围第24项之方法,其中该脂多糖诱发T─与B─淋巴细胞的细胞分裂之能力系以放射标识的(3H)胸腺嘧啶之吸收证明之。27﹒根据上述申请专利范围第10至15项以及第17至21项中任一项之方法,用以对革兰氏阴性菌病免疫且其中该细菌突变体为ATCCNO﹒53000。28﹒根据上述申请专利范围第16项之方法,用以对革兰氏阴性菌病免疫且其中该细菌突变体为ATCCNO﹒53000。29﹒根据上述申请专利范围第22项之方法,用以对革兰氏阴性菌病免疫且其中该细菌突变体为ATCCNO﹒53O00。
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