METHOD FOR OBTAINING AND PURIFYING THE CARBOXYL-TERMINAL FRAGMENT OF THE DNA POLYMERASE I OF -i(STREPTOCOCCUS PNEUNOMIAE).

摘要

L'invention concerne un procédé pour le subclonage d'un fragment du gène po1A du S.pneumoniae en un vecteur d'expression de E.coli. A l'aide de ce procédé, on a pu obtenir le plasmide recombinant pSM10. Ce plasmide code pour un polypeptide de 70,6 kDa qui possède l'activité polymérase exempte d'activité exonucléase de l'enzyme ADN polymérase-exonucléase de S.pneumoniae. Le polypeptide a été hyperexprimé et purifié à partir de E.coli. Le rendement de l'enzyme active obtenu correspond approximativement à 7 % du contenu protéique cellulaire. On a obtenu 0,73 mg de protéine pure à partir de 500 ml de culture, avec une activité enzymatique spécifique de 13537 unités d'ADN polymérase par mg de protéine.