| 主权项 |
1.一种可于免疫分析中充作讯号扩大器之分子探 针,包括 :(a)一个第一区(A),其为一种多 ,作用如与已知抗原 具特异性之抗体:(b)一个第二区(B),其为双股的聚 核 酸,可作用如DNA-作赖性RNA聚合酵素活性之启动子; 及( c)一个第三区(C),其系单或双股,且邻接第二区,如 此 第三区可作用如第二区启动子活性之模板。2.根 据申请专利范围第1项之探针,其中DNA依赖性RNA聚 合 活性系衍自噬菌体T7。3.根据申请专利范围第1 或2项之探针,其中第二区B至少 10个且不超过40个核酸长度。4.根据申请专利范围 第3项之探针,其中第三区C至少30个 且不超过80个核 酸长度。5.根据申请专利范围第2 项之探针,其中聚合 活性是衍 自噬菌体T7,且第二区B之序列包括以下序列:5' - TAA TAC GAC TCA CTA TA-3'3' - ATT ATG CTG AGT GAT AT-5 '6.根据申请专利范围第2项之探针,其中聚合 活性 是衍 自噬菌体T7,其中第二区B之核 酸序列是:5' - CTG GCT TAT CGT AAT TAA TAC GAC TCA CTA TA-3'3' - GAC CGA ATA GCT TTA ATT ATG CTG AGT GAT AT-5'7.根据申请专利范 围第1或2项之探针,其中第三区C核 酸序列上股之5'残基,邻接第二区B,且是一个鸟核 ( Guanosine)。8.根据申请专利范围第1或2项之探针,其 中第三区C之序 列是:5' - GGG AGA TGT GGT TGT CGT ACT TAG CGT AAT ACT GTC CGA GTC G-3'3' - CCC TCT ACA CCA ACA GCA TGA ATC GCT TTA TGA CAG GCT CAG C-5'9.根据申请专利范围 第8项之探针,其中第二区B DNA核 酸序列上股的3'端,连接至C区核 酸序列上股5'端。 10.根据申请专利范围第1项之探针,其中第三区C之 转录 子具有二个亚区。(a)一个第一亚区c1,其可与寡核 酸 捕获连接子杂交,捕获连接子可与固化在固体受质 上之聚 核 酸杂交;及(b)一个第二亚区c2,其可结合至寡核 酸标记连接子,标记连接子可与可定量之探针结合 。11.根据申请专利范围第1项之探针,其中官能性 单位包括 第二及第三区(B及C),存在多样的重覆单位中。12. 一种于免疫分析中扩大可侦测讯号之方法,其包括 :( a)可直接或间接结合至分析物之生化分子探针,其 包括一 个结合区(A)该结合区(A)包括作用如一抗体的多 , 及一 个第二区(B),其为一种双股DNA序列可作用如DNA一依 赖 性RNA聚合 酵素活性之启动子,及一个第三区(C)其 可为 单或双股,且邻接第二区,如此第三区可作用如第 二区启 动子活性之模板;(b)除去未结合的探针;(c)经由DNA- 位 赖性RNA聚合 活性转录多套数之RNA寡物,其系互补 于探 针构体第三区C之模板序列c';及(d)定量RNA转录子。 13.根据申请专利范围第12项之方法,其中分析物先 直接 或间接地固化至固相受质。14.根据申请专利范围 第12或13项之方法,其中A区是作用 如抗体之多 ,且探针直接或间接地经由A区结合至 分析 物。15.根据申请专利范围第12或13项之方法,其中:( a)探针 的A区是一种单股聚核 酸;且(b)分析物间接结合至 分子 探针,系经由有第二区之蛋白质/聚核 酸杂交连接 分子 :(i)一个第一区,其是单股聚核 酸序列实质上互补 于 探针之A区序列;及(ii)一个第二区,其作用如抗体, 与 分析物具特异性或与分析物具特异性之抗体的抗 原决定位 具特异性。16.根据申请专利范围第12或13项之方法 ,其中第二区B系 衍自噬菌体T7之DNA-依赖性RNA聚合 。17.根据申请专 利范围第12或13项之方法,其中:(a)探针 之第三区C于经标记之核糖核 酸三磷酸存在下转 录:(b) 第三区之转录子具有一个第一亚区c1,其互补于已 固化在 固体受质上之寡核 酸捕获探针;且(c)该转录子被 固化 及定量。18.根据申请专利范围第12或13项之方法, 其中:(a)第一 探针之第三区C,于经生物素化之核糖核 酸三磷酸 存在 下转录:(b)第三区之转录子具有一个第一亚区c1,其 互 补于经标记之寡核 酸探针;(c)转录子固化至抗生 物素 化之固体受质上及(d)定量转录子。19.根据申请专 利范围第12或13项之方法,其中:(a)探针 之第三区C于经标记且生物素化之核糖核 酸三磷 酸存在 下转录:(b)转录子固化在经抗生物素化之固体受质 上: 及(c)定量转录子。20.根据申请专利范围第12或13项 之方法,其中:(a)探针 之第三区C之转录子有二个亚区:(i)一个第一亚区c1 ,其 互补于寡核 酸捕获探针,捕获探针已固化在固体 受质上 ;及(ii)一个第二亚区c2,其互补于经标记之寡核 酸 探 针:(b)转录子杂交至捕获探针;(c)经标记探针杂交 至该 转录子;及(d)定量经标记的探针。21.根据申请专利 范围第12项之方法,其中含有第一探针 之第二及第三区(B及C)之单位系存在于多样重覆B/C 单位 之中。22.一种可于免疫分析中充作讯号扩大器之 分子探针,包 括:(a)一个第一区(A),包括一个作用如抗体之多 ,其 特异地结全至一个已知分析物上;及(b)一个第二区 (M), 包括多样性之单股寡核 酸亚单位,其可特异地结 合至重 点所在之单股核酸序列。23.根据申请专利范围第 22项之探针,其中第二区M的每个 寡核 酸单位含约15-50 个硷基,且GC含量在约40%至约 60%范围内。24.根据申请专利范围第22项之探针,其 中分子具线型结 构。25.根据申请专利范围第22项之探针,其中分子 具分支结 构。26.根据申请专利范围第22项之探针,其中第二 区至少一 部份的寡核 酸亚单位,经由衍自下式化合物之多 官能基 部份连接:R' - O - R - X (1)∣∣Y∣∣R'其中R 是有机部份,较好是核酸,R1是 基保护基,其在不除 去 固相中合成核酸及不除去环外氮或磷酸酯保护基 之条件下 被除去,X是含磷之基团,其有助于核酸之合成,Y是 衍自 亲核基之基团,且R2是R1或一个阻断或保护基,其可 除去 且以氢置换而不影响R1。27.根据申请专利范围第22 项之探针,其中第二区(M)中至 少一部份的寡核 酸亚单位是经由衍自下式化合物 之多官 能部份而连接:其中Z是一个亲核基,R1是保护基其 通常 是硷安定而酸敏感的,R2是氢或甲基,R3是保护基其 可除 去及以氢置换但不致影响R1,R5是磷衍生物,其可于 化学 合成时令核 酸加至寡核 酸链之5'位置,R6是甲基、 氢 、I、Br或F,且X是1至8之整数(二数也包括)。28.根据 申请专利范围第22项之探针,其中该第二区(M)中 至少一部份之寡核 酸亚单位,系经由衍自下式化 合物之 多官能部份连接:其中R是该 基保护基,iPr是异丙基 , 且R1是甲基或-氰基乙基。29.一种扩大可侦测讯 号之方法,此讯号可于免疫分析中 侦测及定量抗原,此方法包括:(a)直接或间接结合 至分 析物的一个生化分子探针,其含有一个结合区(A)该 结合 区(A)包括作用如一抗体的一多 ,及一个第二区(M), 其 包括多样性之单股DNA寡聚之亚单位,可杂交至一个 单股 的经标记寡核 酸;(b)除去未结合之探针;(c)杂交单 股 的经标记寡核 酸,其包括一个核 酸序列,序列实质 上 互补于M区探针之亚单位序列,杂交至第二区之亚 单位;( d)除去支结合的经标记寡核 酸;及(e)定量结合至探 针 之经标记寡核 酸之量。30.根据申请专利范围第29 项之方法,其中分析物先直接 或间接地固化至固相受质。31.根据申请专利范围 第30项之方法,其中A区是一个可作 用如抗体之多 ,且探针直接或间接地经由A区结合 至分 析物。32.根据申请专利范围第31项之方法,其中A区 之多 特异 地结合至与分析物可特异地结合的抗体之抗原决 定位上。33.根据申请专利范围第29项之方法,其中: (a)探针之A 区是一种单股聚核 酸;且(b)分析物间接结合至分 子探 针,系经由具有二区之蛋白质/聚核 酸杂交连接分 子:( i)一个第一区,其是一个单股的聚核 酸序列,实质 地互 补于探针之A区序列,(ii)一个第二区,其作用如抗体 , 与分析物具特异性。34.一种于竞争性免疫分析中 扩大可侦测讯号之方法,此 方法包括:(a)构筑一个分子探针,包括:(i)一个第一 区 (A),其可作用如免疫原;(ii)一个第二区(B),其是一个 双股的聚核 酸,可作用如DNA一依赖性RNA聚合 酵素 活 性之启动子;及(iii)一个第三区(C),其为单或双股且 邻 接第二区,如此第三区可作用如第二区启动子活性 之模板 ;(b)于竞争性分析物存在下,将探针直接或间接地 固化 至固相受质上;(c)除去未结合之探针;(d)经由DNA-依 赖 性RNA聚合 活性,转录多套数之RNA寡物,其系互补于 探 针构体第三区C之模板序列c';及(e)定量RNA转录子。 35.一种于竞争性免疫分中扩大可侦测讯号之方法, 此方 法包括:(a)构筑一个分子探针,包括:(i)一个第一区( A ),其可作用如免疫原;及(ii)一个第二区(M),包括多 样 性之单股寡核 酸亚单位,其可特异地结合至重点 所在之 单股核酸序列;(b)于竞争性分析物存在下,将探针 直接 或间接地固化至固相受质上;(c)除去未结合之探针 ;(d) 杂交单股经标记寡核 酸至第二区之亚单位,此寡 核 酸 包括实质上互补于M区探针亚单位序列之核 酸序 列;(e) 除去未结合之经标记寡核 酸;及(f)定量结合至探 针之 |
