一套将质粒表达系统经优化重组到大肠杆菌染色体的方法

摘要

本发明涉及生物技术和合成生物学领域，具体公开了一套将质粒上的表达系统经过优化无痕插入染色体从而得到完全替代原质粒功能的重组大肠杆菌构建方法，本发明寻找到一个普遍存在的大肠杆菌染色体位置(insH11基因)，用外源基因替换insH11基因序列，改造后的菌体在广泛使用的培养条件下生长和代谢无障碍。本发明还提供了一套无痕在此位置插入外源基因的重组大肠杆菌的构建方法、相关重组菌株和基因重组质粒。

主权项

一套将质粒上的表达系统无痕插入染色体的重组大肠杆菌构建方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将大肠杆菌菌株染色体上的tolC基因敲除，获得缺失tolC基因的菌株A；S2、将带有大肠杆菌自身启动子序列的tolC基因重组至菌株A染色体上的insH11基因处，完全替换insH11基因序列，利用SDS进行筛选，得到菌株B；S3、再将拟重组的外源基因重组至菌株B中，完全替换菌株B染色体上的tolC基因，利用大肠杆菌素colicin E1进行筛选，得到菌株C；S4、将完整的野生型tolC基因重组回菌株C原有tolC基因缺失的位置，利用SDS进行筛选，即得。