重组淋巴毒素衍生物的生产工艺

摘要

本发明利用CN1175638所述淋巴毒素衍生物工程菌,完善了重组菌的发酵、包涵体蛋白的制备、包涵体蛋白的变性复性以及淋巴毒素衍生物的分离纯化,达到稳定表达和高收率、高纯度。提供了能大规模生产的重组淋巴毒素衍生物的生产工艺。

主权项

1．重组淋巴毒素衍生物的生产工艺，所述工艺以N端缺失27个氨基酸的rhLTαDa cDNA克隆入大肠杆菌表达载体pRSET C，所得重组子导入大肠杆菌BL21(DE3)得到工程菌，其特征在于：(1)将所述工程菌在发酵罐中采用改良M9培养基发酵，温度30-37℃，pH6.7-7.2，通气量5-15L/分钟，罐压0.01-0.02M Pa，控制溶解氧浓度为20-40％，适时加补料培养基和加IPTG；(2)收集菌体、破碎和收集包涵体后，以三种洗涤剂依次洗涤包涵体；(3)用尿素、盐酸胍或氨水将包涵体增溶；(4)用硼砂复性液或Tris复性液进行复性：(5)相继用Q-Sepharose FF离子交换柱层析、Phenyl-Sepharose FF疏水层析和CM-Sepharose FF离子交换柱层析进行纯化。