| 主权项 |
1﹒一种制法主要由s及前s2蛋白质组成之抗原性HBV粒子之方法,该方法包含:(a)用至少一含有s结构基因之表现套组转形巴斯德毕赤酵母菌,其中s结构基因以可运作之方式连接于调节区域及3"终止顺序上;以及用至少一含有前s2结构基因之炕@穛{套组转形上述甲基营养性酵母菌,其中前s2,结构基因以央@i运作之方式连接于调节区域及3终止顺序上;(b)于适当条央@韝U培养生成之经转形酵母菌菌株以生产该HBV粒子;其中使央@峞]1)第一个整合部位一特异性载体,其含有下列依序排列之瓷@掍驉G(i)第一个可插入DNA片段,(ii)标记基因,以丑@峖雂痐@个含有前s2结构基因且该基因以可运作方式与调节区﹛@O域及3"终止顺序连接之表现套组,及(iii)第二个可插入DNA片段;其中组份(ii)之标记基因及表现套组可交换;(2)第二个整合载体,其含有下列组份;(i)至少一个可插入DNA片段,(ii)标记基因,以及至少个含有s结构基因且该基因以可连作方式与调节区域及3"终止顺序连接之表现套瓷@捸A其中组份(ii)之标记基因及表现套组可以交换;且该央@i插入DNA片段衍生自由巴斯德毕赤酵母菌分离出之基因之╮@牶隃炩阳A且选自包括AOXI、P40.DHAS及HI╮@屣部C2﹒根据申请专利范围第1项之方法,其中至少一表现套组包含:(a)调节区域,其选自包括出巴斯德毕赤酵母留分离出之AOXI、P40.DHAS,由酿酒酵母菌分离出之磷酸酸、乳激醣、醇去氢酸、细胞色素c、a一交配因子及甘油醛3一磷酸去氢,其可运作地连接于(b)前s2结构基因,其可运作地连接于(c)衍生自巴斯德毕赤酵母菌之3"终止顺序,其选自包括央@悢洘摃璇蚾礡BP40基因、DHAS基因及HIS4基因分离央@X之3终止顺序。3﹒根据申请专利范围第1或2项之方法,其中至少一表现套组包含:(a)调节区域,其选自包括出巴斯德毕赤酵母菌分离出之AOXI、P40.DHAS,由酿酒酵母菌分离出之磷酸、乳激、醇去氢酸、细胞色素c、a一交配因子、及甘油醛3─磷酸去氢,其可运作地连接于(b)s结构基因,其可运作地连接于(c)衍生自巴斯德毕赤酵母菌之3"终止顺序,其选自包活@A由AOXI基因、P40基因、DNAS基因及HIS4基因丑@擢鬙X之3终止顺序。4﹒根据申请专利范围第1或2项之方法,其中该标记基因选自包括出巴斯德毕赤酵母菌分离出之HIS4及ARG4I,由酿酒酵母菌分离出之SUC2,以及新霉素基因Tn903及Tn601。5﹒根据申请专利范围第4项之方法,其中该标记基因之选择系独立的。6﹒根据申请专利范围第1或2项之方法,其中该含有前s2结构基因之载体包含:(a)第一个可插入DNA段,其为衍生自巴斯德毕赤酵母菌之约1仟基5AOXI调节区域,其可运作地连接于(b)前S2给构基因,其可运作地连接于(C)分离自巴斯德毕赤酵母菌之AOXI之3"终止顺序,其粘接于(D)标陛@O基因,其为分离自巴斯德毕赤酵母菌之HIS4,其粘接于(╮@荂^第二个可插入DNA片段,其为约0﹒65仟碳基之3AO╮@璇袉蚺貕阳C7﹒根据申请专利范围第1或2项之方法,其中该含有S结构基因之载体包含:(a)可插入DNA片段,其为分离自巴斯德毕赤酵母菌之约1仟基5"AOXI调节区域,其可运作地连接于(╮@瞗^S结构基因,其可运作地连接于(c)分离自巴斯德毕赤酵央@恳艉坎洘摃璇蚺坎终止顺序,其粘接于(d)标记基因,其为分离自酿酒酵母菌之ARG4,其粘接于(e)可插入DNA片段,其为约0﹒65仟基之3"AOXI终止顺序。8﹒一种制备整合载体之方法,其包含(a)至少一可插入DNA片段,其为衍生自巴斯德毕赤酵母菌之5"AOXI基因之约1仟@b基可运作调节区域,其可运作地连接于(b)s结构基因,其央@i运作地连接于(c)分离自巴斯德毕赤酵母菌之AOXI之3"终止顺序,其粘接于(d)标记基因,其为分离自巴斯德毕赤酵母菌之ARG4,其粘接于(e)第二个可插入DNA片段,其为约0﹒65仟基3"AOXI终止顺序。图示简单说明图1代表质体pA0801,图2代表质体pA0802,图3代表质体pA0803,图4代表质体pA0811,图5A图示质体pA0801及pA0802之构筑。图58图示质体pA0803及pA0811之构筑。图6代表含有HBV血清型adw之前S2基因之HBV o图7代表质体pYM4,图8代表质体pYM10,图9代表质体pA0804 |
