| 摘要 |
L'invention concerne un substrat permettant l'évaluation d'enzymes glycosidiques comprenant un dérivé de résorufine de la formule générale (I), dans laquelle Gly représente un glucide lié à la résorufine par une liaison glucosidique, dans laquelle au moins un des substituants R1, R2, R4, R6, R8 et R9 représente un reste lipophile de la formule -L(CH2)nCH3, dans laquelle n est supérieur à 3 et inférieur à 22, et dans laquelle L représe un méthylène -CH2- un amide -NHCO-, un sulfonamide -NHSO2-, un carboxamide -CONH-, un ester de carboxylate -COO-, un uréthane -NHCOO-, une urée -NHCONH-, ou une thio-urée -NHCSNH-, et dans laquelle les substituants restants R1, R2, R4, R6, R8 et R9, pouvant être identiques ou différents, représentent hydrogène, halogène ou d'autres restes lipophiles, lesquels peuvent être identiques ou différents, contenant environ 1 à environ 22 atomes de carbone de la formule -L'(CH2)mCH3, dans laquelle m est inférieur à 22, et dans laquelle L' représente un méthylène -CH2-, un amide -NHCO-, un sulfonamide -NHSO2-, un carboxamide -CONH-, un ester de carboxylate -COO-, un uréthane -NHCOO-, une urée -NHCONH-, ou une thio-urée -NHCSNH-. Un mode de réalisation préféré de l'invention est un substrat non-fluorescent spécifiquement hydrolysable par une glucosidase à l'intérieur d'une cellule afin de produire, après plus d'environ 2 minutes, un produit de détection fluorescent de couleur orange à rouge retenu à l'intérieur d'une cellule viable pendant plus d'environ 2 heures à une température supérieure à environ 15 °C, et lequel est non-toxique pour la cellule. On utilise les substrats afin d'évaluer une enzyme glycosidique dans des cellules végétalo-animales vivantes, que l'enzyme soit présente de manière endogène, sous la forme d'un résultat d'une manipulation du génome de la cellule, ou qu'elle soit ajoutée à la cellule de manière exogène, telle que par liaison covalente de l'enzyme à une protéine afin de former un complexe enzyme-protéine pénétrant dans la cellule. |
