Leber氏遗传性视神经病变检测方法及其试剂盒

摘要

本发明是一种临床检测Leber氏遗传性视神经病变的方法及其试剂盒。根据本病患者存在线粒体点突变致使正常线粒体DNA中限制性内切酶SfaNI识别位点丧失的特点，利用特定的抗凝剂、溶血液和一对引物，经PCR扩增后的产物不能被SfaNI限制性内切酶消化切割而检测本病。本发明的有益效果是解决了以往只能靠家族遗传史来诊断Leber氏遗传性视神经病变的问题，为临床明确检测本病提供了一种简便、可靠的方法和试剂盒。

主权项

1、一种临床检测Leber氏遗传性视神经病变的试剂盒，其特征在于由抗凝剂、溶血液、一对引物、dNTP、TaqDNA多聚酶、10×Buffer、SfaNI限制性内切酶、NEBuffer3各一管组成，具体为：(1.1)特定抗凝剂EDTANa2 2gNaCl 0.85g加水至 100ml(1.2)一对引物各一管5′AGCCCTCGTAGTAACAGCCA-3′轻链POS.11641～11660，每微升500纳克。5GGAGTATAGGGCTGTGACTA-3′重链POS.11980～11961，每微升500纳克。(1.3)dNTPdNTP 200毫微克；(1.4)TaqDNA多聚酶；TaqDNA多聚酶1.2单位：(1.5)10×Buffer10×Buffer 5微升；(1.6)SfaNI限制性内切酶SfaNI(New England Biolabs产)(1.7)NEBuffer3NEBuffer3(New England Biolabs产)′(1.8)溶血液：Tris-Hcl 10mmol/L.pH7.5NaCl 10mmol/L，MgCl2 5mmol/L。