发明名称 鸟结核分枝杆菌复合种之放大及侦测方法
摘要 揭示对鸟结核分枝杆菌复合种的dnaJ基因内的标的序列进行复合种-特异的放大作用所用之放大引子及放大方法。亦提供检定探针用以侦测放大产物及/或监定存在的MAC菌种。
申请公布号 TW349123 申请公布日期 1999.01.01
申请号 TW085109896 申请日期 1996.08.14
申请人 贝登狄金森公司 发明人 雪儿H.帝恩
分类号 C12Q1/68 主分类号 C12Q1/68
代理机构 代理人 郑自添 台北巿敦化南路二段七十七号八楼
主权项 1.一种包含一标的结合序列之放大引子,该标的结合序列为选自如下序列辨识码(SEQ ID NO)为SEQ ID NO:1, SEQID NO:2及SEQ ID NO:3的标的结合序列:2.如申请专利范围第1项之放大引子,其为选自SEQ ID NO:1, SEQ ID NO:2及SEQ ID NO:3。3.一种寡聚核酸,系由如下序列SEQ ID NO:4, SEQ IDNO:5或SEQ ID NO:6所组成:4.一种寡聚核酸,系由如下序列SEQ ID NO:7, SEQ IDNO:8, SEQ ID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12所组成:5.如申请专利范围第4项之寡核酸,其系以可侦测标记来标示,该可侦测标记系选自放射性同位素,萤光基团,化学萤光剂,及结合基,且该结合基系选自生物素,卵白素,抗生蛋白链菌素,半抗原,抗体及抗原。6.一种对鸟结核分枝杆菌复合种的标的核酸进行复合种专一的放大作用的方法,包含;a)将包含SEQ ID NO:1之标的结合序列的第一放大引子与包含SEQ ID NO:2或SEQIDNO:3之标的结合序列的第二放大引子与标的核酸杂交,且序列结构如下:b)在一放大反应中,经由在标的核酸上延长已杂交的第一及第二放大引子来将标的核酸放大。7.如申请专利范围第6项之方法,进而包含藉由与SEQ IDNO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12所组成且以可侦测标记来标示的侦器探针杂交来侦测已放大的标的核酸,其中可侦测标记系选自放射性同位素,萤光基团,化学萤光剂,及结合基,且该结合基系选自生物素,卵白素,抗生蛋白链菌素,半抗原,抗体及抗原,且序列结构如下:8.如申请专利范围第7项之方法,其中已放大之标的核酸系藉由杂交由SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8所组成且以一结合基来标记的捕捉探针来捕捉以侦测,且该结合基系选自生物素,卵白素,抗生蛋白链菌素,半抗原,抗体及抗原,且序列结构如下:9.如申请专利范围第6项之方法,其中该第一及第二放大引子进而包含一限制性核酸内切辨识位置,当该辨识位置被半修改时该限制性核酸内切可于该辨识位置切口,且该标的核酸系以单股置换放大方法来放大。10.如申请专利范围第9项之方法,其中第二放大引子包含SEQ ID NO:2标的结合序列,且已杂交的第一及第二放大引子系藉将SEQ ID NO:5(5'GCGCTTGGCCG3')所组成的第一障碍引子及由SEQ ID NO:6(5'GACAATCCCGC3')所组成的第二障碍引子延长来从标的核酸上置换掉。11.如申请专利范围第9项之方法,其中第二放大引子包含SEQ ID NO:3标的结合序列,且已杂交的第一及第二放大引子系藉由将SEQ ID NO:4(5'AGCTGGGCGTCTC3')所组成的第一障碍引子及由SEQ ID NO:5所组成的第二障碍引子延长来从标的核酸上置换掉。12.如申请专利范围第6项之方法,其中该第一放大引子系由SEQ ID NO:1标的结合序列所组成且该第二放大引子系由SEQ ID NO:2标的结合序列或SEQ ID NO:3标的结合序列所组成,且该标的核酸系由聚合连锁反应所放大。13.一种对鸟结核分枝杆菌复合种的标的核酸进行复合种专一的放大作用的方法,包含:a)将由SEQ ID NO:1序列所组成的第一放大引子与由SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:3序列所组成的第二放大引子与标的核酸杂交,且序列结构如下:b)藉单股置换放大来放大标的核酸。14.如申请专利范围第13项之方法,进而包含藉由与SEQID NO:9, SEQ ID NO:10, SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12所组成且以可侦测标记来标示的侦器探针杂交来侦测已放大的标的核酸,其中可侦测标记系选自放射性同位素,萤光基团,化学萤光剂,及结合基,且该结合基系选自生物素,卵白素,抗生蛋白链菌素,半抗原,抗体及抗原,且序列结构如下:15.如申请专利范围第14项之方法,其中已放大之标的核酸系藉由杂交由SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8所组成且以一结合基来标记的捕捉探针来捕捉以侦测,且该结合基系选自生物素,卵白素,抗生蛋白链菌素,半抗原,抗体及抗原,且序列结构如下:16.如申请专利范围第13项之方法,其中第二放大引子系由含SEQ ID NO:2所组成,且已杂交的第一及第二放大引子系藉将SEQ ID NO:5(5'GCGCTTGGCCG3')所组成的第一障碍引子及由SEQ ID NO:6(5'GACAATCCCGC3')所组成的第二障碍引子延长来从标的核酸上置换掉。17.如申请专利范围第13项之方法,其中第二放大引子系由SEQ ID NO:3所组成,且已杂交的第一及第二放大引子系藉由将SEQ ID NO:4(5'AGCTGGGCGTCTC3')所组成的第一障碍引子及由SEQ ID NO:5所组成的第二障碍引子延长来从标的核酸上置换掉。
地址 美国