发明名称 血液中幽门螺杆菌抗原
摘要 本发明系关于发现并检测受感染个体之血液中的幽门螺杆菌(H. pylori)抗原。幽门螺杆菌抗原系来幽门螺杆菌细胞之成分,其包含,但不限于DNA、RNA及核酸、蛋白质或胜之片段。幽门螺杆菌DNA、RNA及核酸片段可藉由聚合链反应(PCR)、连接链反应(LCR)或DNA杂交法或其他扩增法检测。幽门螺杆菌蛋白质或其胜或其他的抗原性成分可藉由使用抗幽门螺杆菌之抗体,较佳系由亲和性管柱纯化得之抗体之免疫分析或免疫印迹法予以检测。本发明进一步提供用于检测血清样品中之幽门螺杆菌抗原之免疫分析方法、诊断套组及免疫层析分析装置。
申请公布号 TWI237695 申请公布日期 2005.08.11
申请号 TW089126426 申请日期 2000.12.12
申请人 九毓生物科技股份有限公司 发明人 尹庆燧;洪忠和
分类号 G01N33/569 主分类号 G01N33/569
代理机构 代理人 林镒珠 台北市中山区长安东路2段112号9楼
主权项 1.一种侦测幽门螺杆菌感染之方法,包括检测血液中幽门螺杆菌(H. pylori)抗原,该抗原系藉由使用一对专一用于检测幽门螺杆菌之引子进行聚合链反应(PCR)予以检测。2.一种侦测幽门螺杆菌感染之方法,包括检测血液中幽门螺杆菌抗原,该抗原系藉由连接链反应(LCR),使用DNA连接及专一性检测幽门螺杆菌的第一组及第二组寡核酸,第一组之寡核酸彼此相连,第二组互补于第一组,第二组寡核酸彼此相连。3.一种侦测幽门螺杆菌感染之方法,包括检测血液中幽门螺杆菌抗原,该抗原系藉由DNA杂交法,使用幽门螺杆菌DNA探针检测者。4.一种侦测幽门螺杆菌感染之方法,包括检测血清中幽门螺杆菌抗原,该抗原系藉由抗幽门螺杆菌之抗体使用免疫分析法或免疫印迹分析法予以检测。5.一种检测血清样品中的幽门螺杆菌抗原之方法,包括:制备该血清样品;制备抗幽门螺杆菌之第一抗体,其中该第一抗体系藉亲和性管柱予以纯化;使该血清样品与该第一抗体接触,形成第一复合物;制备抗幽门螺杆菌之第二抗体,其中该第二抗体系藉亲和性管柱予以纯化;使该第一复合物与该第二抗体接触,形成第二复合物;及检测该血清样品中幽门螺杆菌之存在。6.如申请专利范围第5项之方法,其中该第一及第二抗体之一系键结于固体载体,另一者则经检测剂标示。7.如申请专利范围第6项之方法,其中该固体载体为聚乙烯、聚苯乙烯、聚丙烯或硝化纤维素膜。8.如申请专利范围第6项之方法,其中该检测剂包括选自由下列组群所成之至少一者:检测剂可为酵素型标示物、萤光或发光剂、放射性活性标记及呈色粒子。9.如申请专利范围第8项之方法,其中该酵素型标示物包括硷性磷酸或辣根过氧化。10.如申请专利范围第8项之方法,其中该萤光或发光剂包括选自由下列组群所成之至少一者:萤光黄、蔷薇红、铕、胺基苯二醯胼及。11.如申请专利范围第8项之方法,其中该呈色粒子包括选自由下列组群所成之至少一者:金、银、蓝胶乳、及硒。12.如申请专利范围第11项之方法,其中该第一抗体系键结于该固体载体,而该第二抗体系经该酵素型标示物标示。13.如申请专利范围第11项之方法,其中该第一抗体系经该呈色粒子标示,而该第二抗体系键结于该固体载体。14.如申请专利范围第5项之方法,进一步包括以分离剂或样品分离条件处理该血清样品的步骤。15.如申请专利范围第14项之方法,其中该分离剂包括具有至少1M莫耳浓度之NaCl或KCl。16.如申请专利范围第14项之方法,其中该分离剂包括清洁剂,该清洁剂包括选自由下列组群之至少一者:SDS、土温乳化剂20、辛基葡萄糖、去氧基胆酯及Triton X-100。17.如申请专利范围第14项之方法,其中该分离剂包括有机溶剂,该有机溶剂包括选自由下列组群之至少一者:二恶烷及乙二醇。18.如申请专利范围第14项之方法,其中该分离剂包括选自由下列组群所成之促混乱剂:胍盐酸盐、及硫代氰酸钾。19.如申请专利范围第14项之方法,其中该分离剂包括选自由下列组群所成之至少一种酵素:蛋白及脂。20.如申请专利范围第14项之方法,其中该样品分离条件包括将该体液之pH调至不低于9或不高于3。21.如申请专利范围第14项之方法,其中该样品分离条件包括将该血清样品之温度调至不低于50℃。22.如申请专利范围第14项之方法,进一步包括使该血清样品与以蛋白质为主之试剂反应。23.如申请专利范围第22项之方法,其中该以蛋白质为主之试剂包括选自下列组群之至少一者:胎牛血清、猪血清、正常的山羊血清、马血清、酪蛋白、白蛋白、明胶、及牛血清白蛋白。24.如申请专利范围第5项之方法,进一步包括:制备抗产生对抗该第二抗体之动物物种的抗体之二次抗体;及使该第二复合物与该二次抗体接触,形成第三复合物。25.如申请专利范围第24项之方法,其中该二次抗体系经包括选自由下列组群所成之至少一种检测剂标示者:酵素型标示物、萤光或发光剂、放射性活性标记及呈色粒子。26.一种检测血清样品中的幽门螺杆菌之诊断套组,包括:抗幽门螺杆菌之第一抗体,其中该第一抗体系经亲和性管柱纯化,且该第一抗体键结于一固体载体;及经检测剂标示之抗幽门螺杆菌的第二抗体,其中该第二抗体系藉亲和性管柱予以纯化者;及适于检测或扩增该检测剂的试剂。27.如申请专利范围第26项之诊断套组,进一步包括以蛋白质为主之试剂,该以蛋白质为主之试剂包括选自下列组群之至少一者:胎牛血清、猪血清、正常的山羊血清、马血清、酪蛋白、白蛋白、明胶、及牛血清白蛋白。28.如申请专利范围第26项之诊断套组,进一步包括分离剂,该分离剂包括选自下列组群之至少一者;至少1M之NaCl、至少1M之KCl、胍盐酸盐、、硫代氰酸钾、SDS、土温乳化剂20、辛基葡萄糖、去氧基胆酯、Triton X-100、二恶烷、乙二醇、蛋白及脂。29.如申请专利范围第26项之诊断套组,其中该检测剂为辣根过氧化,该试剂为四甲基联苯胺受质。30.一种检测血清样品中的幽门螺杆菌之诊断套组,包括:抗幽门螺杆菌之第一抗体;抗幽门螺杆菌之第二抗体;抗产生对抗该第二抗体之动物物种的抗体之二次抗体,其中该二次抗体系经包括选自由下列组群所成之至少一种检测剂标示者:酵素型标示物、萤光或发光剂、放射性活性标记及呈色粒子;及适于检测或扩增该检测剂的试剂;其中,该第一抗体与该第二抗体系经亲和性管柱予以纯化。31.如申请专利范围第30项之套组,其中该检测剂为辣根过氧化,该试剂为四甲基联苯胺受质。32.一种检测血清样品中的幽门螺杆菌之免疫层析分析装置,包括:具有样品添加区及结果观察区之固体载体,其中该血清样品系添加至该样品添加区;抗幽门螺杆菌之第一抗体,其中该第一抗体系经呈色粒子标示,且该第一抗体连接于该样品添加区与该结果观察区之间;抗幽门螺杆菌之第二抗体,其中该第二抗体系键结于该结果观察区之层析介质上;其中,该第一抗体与该第二抗体系经亲和性管柱予以纯化。33.如申请专利范围第32项之免疫层析分析装置,其中该固体载体为硝化纤维素膜、聚酯膜、或尼龙膜。34.如申请专利范围第32项之免疫层析分析装置,其中该呈色粒子系由下列组群选出者:金、银、蓝胶乳、及硒。35.如申请专利范围第32项之免疫层析分析装置,进一步包括抗产生对抗该第一抗体之动物物种的抗体之二次抗体,该二次抗体系键结于比该第二抗体之该样品添加区更远之该结果观察区边缘。
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