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"ENSAIO PARA A ATIVIDADE DE RNASE H". A presente invenção refere-se a um método de detecção de uma clivagem mediada por nuclease de um ácido nucléico alvo através de hibridização de um ácido nucléico alvo a uma sonda de oligonucleotídeo fluorescentemente rotulada complementar ao ácido nucléico alvo e contendo um fluoróforo em um término e um grupo de resfriamento brusco no outro término. Quando a sonda não é hibridizada ao ácido nucléico alvo, a sonda adota uma conformação que coloca o fluoróforo e o 'dissipador' em proximidade tal que o 'dissipador' resfria bruscamente o sinal de fluorescência do fluoróforo e a formação do híbrido de sonda alvo causa separação suficiente do fluoróforo e do 'dissipador' para reduzir o resfriamento brusco do sinal fluorescente do fluoróforo. Uma vez hibridizado, o método contata o híbrido de sonda alvo com um agente tendo atividade de nuclease em uma quantidade suficiente para clivar seletivamente o ácido nucléico alvo e, desse modo, liberar a sonda intacta. Detecção da liberação da sonda é, então, medida acompanhando-se uma diminuição no sinal fluorescente do fluoróforo quando comparado ao sinal do híbrido de sonda alvo.
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