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1﹒一种CD25嵌合塑抗体,其包含a)一种免疫球蛋白 之重链,其包含( i)含有经高变异区域CDR1,CDR2和CDR3分开之四个骨架 序 列之可变异区域,此可变异区域具有如下之胺基酸 序列:以及(ii)人 类重链之恒定部分;该CDR1具有胺基酸序列Arg─Tyr ─Trp ─Met─His,该CDR3具有胺基酸序列Ala─lle─Tyr ─Pro─Gly─AsnSer─Asp─Thr─Ser─Tyr─ Asn─Gln─Lys─Phe─Glu─Gly,而该CDR3具有 胺基酸序列Asp─Tyr─Gly─Tyr─Tyr─Phe─Asp ─Phe,和b)一种免疫球蛋白之轻链,其包含(i)依序含 有经高变 异区域CDR'",CDR2'和CDR3'分开之四个骨架序列之可变 异区 域,此可变异区域具有如下之序列:以及(ii)人类轻 链之恒定部分或 其片段,该CDR1'具有胺基酸序列Ser─AlaSer─Ser─╮@ 屣瞱wHe─Ser─Tyr─Met─Gln,该CDR2'具有胺基 酸序列Asp─Thr─Ser─Lys─Leu─Ala─Ser,并 且该CDR3'具有胺基酸序列His─Gln─Arg─Ser─Se╮@ wTyr─Thr。及人类轻链之恒定部分。 2﹒根据申请专利范围第1项之CD25嵌合型抗搅,其中 人类重链的恒定部 分为1型,而人类经链的恒定部分或其片段为x型 。 3﹒一种DNA分子,其包含编码如申请专利范围第1项 所定义之免疫球蛋白 重链之核酸序列。 4﹒一种DNA分孔,其包含编码如申请专利范围第1项 所定义之免疫球蛋白 轻链之核酸序列。 5﹒一种制造多链CD25嵌合型抗体的方法,此方法包 括(1)培养经由申 请专利范围第3项之UNA分子以及经由申请专利范围 第4项之DNA构 建物转化的有机体,和(ii)自培养物中回收CD25嵌合 型抗体,其 中该母表现载体为PSV2─neo─huCrl及psV2─DHFK ─Eu─huCk且所用之生物为老鼠癌细胞系SP2/o。 6﹒一种用以免疫抑制人类免疫系统、或治潦CD25+ 细胞恶性疾病,或是 治疗HIV感染的医药组合合物,此组合物包含申请专 利范围第1项之C D25嵌合型抗体以及医药上可接受载体或稀释剂。 图示简单说明 图1A系概略图,显示1gG分子的构造 以及可为重链和轻链编码的基因。 图1B则概略表示重链和轻链之可变异 领域安排成为框构(FR〉和高变异(CDR)区 中。 图2A和2B显示以南方点墨法,使用为 鼠类重链增强子(图2A)编码或是为鼠类 ck和5段Jk基因片段(图2B〉编码之 32P标识DNA探针,分析鼠类融合瘤RFT5 -IgG2a(1),RFT5一IgGI(2),RFT4(3) 和NS一I的EcoRl一消化基因组DNA的结 果,以EcoRl消化10微克之基因组DNA并 且在0.8%琼脂凝胶上按大小不同分开。 接着将片段转溃至硝基纤维素膜上并以探 针杂合。冲洗之后,令该膜曝置于柯达X 一○Mat底片上隔夜。 图3A和3B显示亲代表现媒介物pSV2一 neo-huCl和pSV2一DHFR-E- huCk。两种质体皆包含氨65青霉素抵抗 基因(ampR)以及PBR322和SV40的复制源 (PBP322 ori和SV40 ori)。pSV2一neo 一huCl的特征在于有新霉素基因( neoR)以及为大类1恒定部分编码之 基因(huCl)的存在,而pSV2-DHFR-E -huCk已插入二氢叶酸还原13(DHFR) 基因(具氨甲蝶呤抵抗性)以及为人类k 恒定部分(huCk)编码的基因。表现嵌合 重链或轻链的最终媒介物系分别得自将为 引导胜15(L)、RFT5-IgG2a重链可变 异领域(VDJ2)以及人类重链增强子编码 的DNA片段插入pSV2一neo一huCl之 中,以及将为引导胜15〈L〉和RFT5一 IgG2a轻链之可变异领域〈VJ2)编码之 DNA片段插入pSV2一DHFR一E一huCk 中。 图4A和46显示分别根据实例5所述之 程序A和B在增强浓度之氨甲蝶呤(MTX) 中生长之各个细胞聚落的生产力。图上Y 轴表示在72小时之内,于109,个细胞中所 产生之单株抗体的毫克量。 图5显示构建CDR取代物之过程,其 法系将CDR卡匣插入至含有4个融合在一 起之框构区域的媒介物中。 图6显示本发明之(X)RFT5一 1gG2a(2a,K〉和(0)鼠类一人类嵌合 MAB对MLR的抑制作用。两种MAB都具有 如Seq.Id.NO.1和2所示之可变异领 域。 图7显示(x)RFT5一1gG2a及(0 )相同鼠类一人类嵌合MAb对PPD特异 HPBM反应的抑制作用。 图8显示RFT5一IgG2a和相同鼠类一 人类嵌合型MAb,在1L一2浓度为5ng/ 毫升(0) 10ng/毫升(0)和20ng/毫 升(x)时,对PPD T一淋巴胚胞增殖( 图8B和8A)以及对MLR T一淋巴胚胞增殖 (图8D和8C)的影响。 |
