富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法

摘要

本发明公开了一种富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法，包括菌种的活化、液体一级菌种的制备、液体二级菌种的制备、小型菌种发酵罐、生产发酵罐、浓缩、喷粉干燥、成品菌粉等步骤。本发明用白海参研磨液作为培养蛹虫草培养基的添加剂，利用液体发酵的方法，可以培育出高硒、高虫草素含量的蛹虫草菌丝体，硒含量可达到98.5微克/克以上，虫草素含量可达到3.15毫克/克以上。

主权项

一种富硒高虫草素含量的虫草菌丝体的培养方法，其特征是：包括下列步骤：（1）菌种的活化：将蛹虫草菌种接在以下培养基中进行活化和优化：葡萄糖15‑20克，硫酸镁1‑2克，磷酸二氢钾1‑2克，维生素B10.1‑0.5毫克，白海参研磨液45‑55克，酵母浸粉3‑5克，琼脂粉15‑20克，加水至1000毫升；将上述营养液在121℃，0.1MPa条件下灭菌30分钟，待冷却后倒入培养皿中；将蛹虫草菌种接入培养皿中，22℃黑暗条件下培养5‑10天，选取生长速度快，菌丝致密，颜色纯正的菌落，再转接到斜面培养基上，22℃黑暗条件下培养5‑10天，所得菌种即所需虫草菌种；（2）液体一级菌种的制备：按以下配方制备液体培养基首先按下列配方配制营养液I：葡萄糖15‑20克，硫酸镁1‑2克，磷酸二氢钾1‑2克，维生素B10.1‑0.5毫克，白海参研磨液45‑55克，酵母浸粉3‑5克，加水至1000毫升；将上述营养液I分装在500毫升的锥形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，待冷却后在超净台上接入活化的虫草菌种，再在130转/分钟，22℃的摇床中震荡培养5‑9天，待液体中出现均匀的菌球且较粘稠状可用；（3）液体二级菌种的制备首先按以下配方配置营养液Ⅱ：葡萄糖15‑20克，硫酸镁1‑2克，磷酸二氢钾1‑2克，维生素B10.1‑0.5毫克，白海参研磨液45‑55克，酵母浸粉3‑5克，加水至1000毫升；将营养液Ⅱ分装在500毫升的锥形瓶中，每瓶250毫升，封口膜封口，在121℃，0.1MPa条件下，灭菌30分钟，待冷却后在超净台上接入一级液体虫草菌种，每瓶5毫升，在130转/分钟，22℃的摇床中震荡培养5‑9天，待液体中出现均匀的菌球且较粘稠状可用；（4）小型菌种发酵罐首先按下列配方配置发酵液I：去皮马铃薯8%，蔗糖2%，玉米淀粉2%，酵母浸粉0.5%，硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.1%，白海参研磨液4‑5%，维生素B10.01%，自然pH值；将上述发酵液I按70%的容量装入50升的液体发酵罐中，按10%的接种量接入二级液体菌种，22℃、通气量0.5‑1.0m3/h，搅拌速度150‑180r/min,培养72‑96h，得到生产用液体菌种；（5）生产发酵罐按下列配方配置发酵液Ⅱ：去皮马铃薯8%，蔗糖2%，玉米淀粉2%，酵母浸粉0.5%，硫酸镁0.1%，磷酸二氢钾0.1%，白海参研磨液4‑5%，维生素B 10.01%，自然PH值；将上述发酵液Ⅱ按70%的容量装入200升的液体发酵罐中，按10%的接种量接入生产用液体菌种，22℃，通气量0.5‑1.0m3/h，搅拌速度150‑180r/min，培养72‑96h；（6）浓缩：将发酵液过滤，使菌丝体和营养液分离，用蒸馏水冲洗2次；（7）喷粉干燥将获得的菌丝体在70‑80℃干燥箱中烘干至恒重；（8）成品菌粉将干燥后的菌粉在‑20℃避光保存。