基于粘性末端‑介导的链置换反应结合聚合切刻等温扩增技术检测UDG活性的方法

摘要

本发明公开了一种基于粘性末端‑介导的链置换反应结合聚合切刻等温扩增技术检测UDG活性的方法，当UDG存在时，单链DNA探针中的两个U碱基被移除，得到含有AP错配的单链DNA探针。基于TSDR对少量错配的特异性识别能力，上述含AP错配的单链DNA探针将不能与含粘性末端的发夹探针发生TSDR，从而使单链DNA探针中的引物序列仍能自由存在。随后，该引物序列与信号报道探针发生杂交，进而引发后续的聚合切刻等温扩增反应，实现了对少量U碱基移除的灵敏响应，提高了检测UDG活性的灵敏度。然而，当UDG不存在时，单链DNA探针能与含粘性末端的发夹探针发生TSDR，导致引物序列被封闭，从而不能引发后续的等温扩增反应，降低了阴性信号。本方法能检测低至0.000027U/mL的UDG活性。

主权项

一种检测UDG活性的探针，包括单链DNA识别探针UP、发夹探针TP以及信号报道探针RP；所述单链DNA识别探针包括：引物序列、1个或两个连续的U碱基，所述两个连续的U碱基在单链DNA的端部；所述发夹探针TP包括，粘性末端、与识别探针UP完全互补的颈部碱基序列；所述信号报道探针RP，是一种发夹结构，3’端含有悬垂的序列，所述悬垂序列能够与识别探针UP序列杂交，颈部含有G4DNA的互补序列和切刻酶Nt.BstNBI的识别序列。