检测家蝇对杀虫剂靶标抗性的方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种检测家蝇对杀虫剂靶标抗性的方法和一种用于家蝇对DDT和拟除虫菊酯类杀虫剂抗性检测的试剂盒。采用根据家蝇钠离子通道基因的敏感与抗性基因型设计的特异性引物，以单头家蝇的基因组DNA为模板，进行钠离子通道基因片段的PCR扩增，再用限制性内切酶消化PCR产物，根据酶切产物的电泳检测结果来区分家蝇个体钠离子通道基因的基因型。该方法具有快速、简便和准确性高的优点，可用于家蝇对DDT和拟除虫菊酯类杀虫剂抗性的监测与预测。

主权项

一种检测家蝇对杀虫剂靶标抗性的方法，所述杀虫剂为DDT和拟除虫菊酯类杀虫剂，其特征在于所述的方法包含步骤：(1)提取单头家蝇基因组DNA；(2)检测家蝇钠离子通道基因1014位上的L1014F突变和L1014H突变；其中，所述的家蝇钠离子通道基因的序列选自SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7；其中，所述的检测是通过PCR方法进行的；其中，所述的PCR方法使用下列引物：P1：SEQ ID NO:1GTGCTGTGCGGAGAGTGG、P2：SEQ ID NO:2GAAGCCTCCATCCTGGGAG、P3：SEQ ID NO:3AGCTGTATACCCTTCTTCT、以及P4：SEQ ID NO:4CGAAGTTGGACAAAAGCAAA；其中，检测家蝇钠离子通道基因1014位上的L1014F突变和L1014H突变包括执行以下的步骤：a)使用引物P1和P2对家蝇基因组DNA进行PCR；b)使用引物P3和P4对家蝇基因组DNA进行PCR；c)使用DNA限制性内切酶Tsp509I将步骤a)得到的PCR产物进行酶切；d)使用DNA限制性内切酶Nla III将步骤b)得到的PCR产物进行酶切；以及e)将步骤c)和d)步骤中得到的酶切产物进行电泳检测，根据所述电泳检测显示的产物条带数和大小区分家蝇的基因型；如果所述电泳检测显示的产物条带数为两条，大小为156bp和220bp，则家蝇的基因型为1014L；如果所述电泳检测显示的产物条带数为四条，大小为156bp，96bp，60bp和220bp，则家蝇的基因型为1014L和L1014F；如果所述电泳检测显示的产物条带数为三条，大小为96bp，60bp和220bp，则家蝇的基因型为1014F；如果所述电泳检测显示的产物条带数为四条，大小为156bp和220bp，170bp，50bp，则家蝇的基因型为1014L和L1014H；如果所述电泳检测显示的产物条带数为三条，大小为156bp和170bp，50bp，则家蝇的基因型为L1014H；如果所述电泳检测显示的产物条带数为六条，大小为156bp，96bp，60bp和220bp，170bp，50bp，则家蝇的基因型为L1014F和L1014H。