一种氧化壳寡糖交联胶原并原位生成纳米银制备抗菌型胶原的方法

摘要

本发明公开了一种氧化壳寡糖交联胶原并原位生成纳米银制备抗菌型胶原的方法，其方法是采用过量的氧化壳寡糖交联胶原，再引入银离子，已连接到胶原上的氧化壳寡糖上的残留醛基将银离子原位还原得到纳米银粒子，并在氨基的作用下得到稳定，从而制备出具有优良使用性能、生物相容性和双重抗菌效果的胶原材料。本方法将胶原的交联、残留醛基的消除与原位纳米银的生成及稳定有机整合起来，为新一代抗菌型胶原材料的制备开辟出了新途径。该方法可用于生物材料与皮革工业中。

主权项

一种氧化壳寡糖交联胶原并原位生成纳米银制备抗菌型胶原的方法，其特征是：（1）交联：称取100重量份的胶原（以干重计）；对于胶原纤维及其聚集体，将其浸泡于1000～10000重量份的pH4.0~12.0的缓冲溶液中，加入1~20重量份的氧化度为10%~95%的氧化壳寡糖，在0℃～45℃条件下保持震荡反应1～48小时；对于提取得到的胶原分子，加入8000～100000重量份的pH3.0～6.5的醋酸溶液，震荡或搅拌使其完全溶解，将1～20重量份的氧化度为10%~95%的氧化壳寡糖溶于20～1000重量份的pH3.0～6.5的醋酸溶液中，将氧化壳寡糖溶液加入到胶原分子溶液中，在0℃～10℃条件下保持震荡或搅拌，反应1～48小时；（2）交联后处理：对于胶原纤维及其聚集体，用硝酸或硫酸铵将浴液pH调至中性，弃去浴液，加入1000～10000重量份的超纯水或注射水，保持震荡或搅拌清洗0.5～2小时，弃去清洗液，反复清洗3~7次；对于提取得到的胶原分子，交联反应后，在0℃~4℃下，首先用氢氧化钠溶液调节pH值为弱碱性（pH值约7.50），缓慢加入固体硫酸铵使其浓度约为1.5 mol/L，连续搅拌至硫酸铵完全溶解，然后静置过夜（10～12h）；次日用高速低温离心机离心分离（8000~12000 r/min，15 min，0℃~4℃），弃上清液，向沉淀中加入800‑10000重量份的pH3.0～6.5的硝酸溶液，搅拌30 min；将其注入透析袋（截留分子量为3500～14000Da）中，在超纯水或注射水中透析2~5天；（3）硝酸银溶液的配置：称取0.017~0.255重量份的硝酸银，溶于1000重量份的超纯水或注射水中；（4）原位生成纳米银：对于交联后的胶原纤维及其聚集体，加入500‑10000重量份的硝酸银溶液，用硝酸调节溶液pH值为1~7，在0℃～37℃条件下保持震荡反应4～48小时；对于提取得到的胶原分子，加入500‑10000重量份的硝酸银溶液至胶原溶液中，在0℃～10℃条件下保持搅拌反应4～48小时；（5）纳米银胶原后处理：对于胶原纤维及其聚集体，弃去浴液，加入1000～10000重量份超纯水，保持震荡或搅拌清洗0.5～2小时，弃去清洗液，反复清洗1～5次，用冷冻干燥机冻干；对于提取得到胶原分子，将反应后的胶原溶液直接注入透析袋（截留分子量为3500～14000Da）中，在超纯水或注射水中透析2~5天。