分析测定伊贝母中贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷含量的方法

摘要

本发明涉及一种分析测定伊贝母中贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷的方法。该方法采用高效液相色谱‑质谱联用技术对贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷三种主要活性成分进行定量测定，经方法学考察试验，确认此方法简便快捷、结果准确、重现性好，是伊贝母中化学成分含量测定的有效手段。

主权项

一种分析测定伊贝母中贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷含量的方法，其特征在于利用高效液相色谱‑质谱条件，具体操作按下列步骤进行：a、高效液相色谱条件：色谱柱：赛默飞世尔Hypersil GOLD,C18 100×2.1mm,1.9μm；流动相为A‑0.1%甲酸水溶液和B‑ 甲醇，按时间0min，2.0min，4.5min,4.6min,7.0min,分别按照80%,45%,45%,80%,80%的A‑0.1%甲酸水溶液和20%,55%,55%,20%,20%的B‑甲醇溶液的体积百分比进行梯度洗脱，流速为 0.2mL/min，柱温为室温，进样量为2μL；b、质谱条件：离子源电压为 +3000伏特；离子源温度为 300℃；鞘气为30arb；辅助气为10arb；离子传输毛细管温度为300℃；电喷雾离子源；贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷的选择检测离子分别为m/z 432.233，m/z 430.219和m/z 592.308；c、对照品溶液的制备：精密称取贝母素甲0.890mg，贝母素乙 0.918mg，西贝母碱苷1.165mg，分别用甲醇溶解定容至1mL，作为对照品溶液储备液；d、样品溶液的制备：温度60℃干燥2小时的伊贝母粉末0.1g，加氨水50μL，再加体积比8:2 的氯仿‑甲醇溶液5.0mL，混匀，超声处理25min，称重，放置过夜，称重，加体积比8:2 的氯仿‑甲醇溶液补足重量，滤过，弃去滤液，精密吸取续滤液1.0mL，氮气吹干，残渣用甲醇1mL超声2min溶解，过0.2μm微孔滤膜，得到样品待测液；e、标准曲线的绘制：精密移取贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷对照品溶液储备液，并用流动相水∶甲醇=80:20分别稀释10⁴,2×10⁴,10⁵,2×10⁵,10⁶,2×10⁶,10⁷,2×10⁷倍，得到混标溶液，按色谱条件进行高效液相色谱‑质谱分析；以浓度对峰面积进行回归分析，得各组分标准曲线，计算回归方程；f、含量测定：精密吸取样品待测液，按色谱条件进行高效液相色谱‑质谱分析，并将峰面积代入标准曲线，分别计算贝母素甲、贝母素乙和西贝母碱苷的含量。