一种蜕膜间充质干细胞的制备方法

摘要

本发明公开了一种蜕膜间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：1)取样及前处理；2)细胞分离；3)细胞传代培养；4)冻存。该方法是从蜕膜组织中制备得到蜕膜间充质干细胞的方法，在建立成熟且安全可靠的分离技术基础上，获得高纯度、高活率、无污染干细胞，并将其长期储存于液氮中，可经复苏做干细胞移植用，并有望逐渐代替价格昂贵的、难以寻找匹配相合的骨髓干细胞。

主权项

一种蜕膜间充质干细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)取样及前处理：取蜕膜组织，用生理盐水洗涤，加入0.8‑1.1倍体积的采集液，低温贮存；2)细胞分离：将经过步骤1)处理后的样品用消毒纱布过滤，对滤液进行病毒检测，若滤液检测结果为阴性，则对相应的过滤后得到的组织进行以下操作：用PBS洗涤2次，剪碎，移入离心管，加入等体积0.25％Ⅰ型胶原酶消化30分钟，后加入等体积Chang完全培养基终止消化，离心，弃上清液，用PBS洗涤，加入Chang完全培养基重悬细胞，得到单细胞悬液；3)细胞传代培养：将步骤2)所得的单细胞悬液接种于Chang完全培养基中培养3‑4天，更换培养基，弃除未贴壁细胞，以后每2‑3天更换培养基一次，待细胞生长达到80％‑90％融合时，用重量百分含量为0.25％的胰蛋白酶消化细胞，加入Chang完全培养基，并收集细胞悬液；将细胞悬液置于离心管中，离心，弃上清液，用PBS洗涤一次，用Chang完全培养基重新悬浮细胞；悬浮后的细胞以5000‑6000个/cm²的密度进行接种传代培养，得到纯化的蜕膜间充质干细胞；4)冻存：将步骤3)蜕膜间充质干细胞用PBS冲洗，加入0.25％的胰蛋白酶消化，加入Chang完全培养基重悬浮，收集悬浮细胞，加入冻存液，先置于装有异丙醇的程序降温盒降温后，再转入液氮罐进行冻存。